, f ' *' ’< -X i .p1 >5 ; P / wW)i f w d m «, ' , . ‘ / 4i , > i ',' H " , . •• < : ' 1 1 ' . \ ,r '' > 1 ' ’tV'‘, 1 '> ’ ' ‘ !. -j , r ' > P ^WteW/4^iP^^ O p),i )l> s (hhj ftcdb IRqjip i /P /, * <'■ —C ' isS^v Wv£vP«fy)ți>fîWn'^4w^^ ’1 3‘h P i1"1 ^WbM^fe’W-ib '' , - 1 ' f‘i ,'K P C 1 '! k »>/ ■< , ?,îs 1 / ? PV !< vi {P til (cW;ri ale desenelor in mi § 8 s Oî C3 g I . f s G. P. Dementiev curvirostra 279-288 169-185 90 -103,6 (95) j 59-73 1 13,2-18 (15,9 I 1 9-13(10,98) 43 -50 j lei superioare; tms.li izuitate din măsurătc 8 1 tfi fi E. Hartert curvirostra 1 *o 1 3 99-102 3 59 -73 00 cq 1 Ims 81—20 00*' 1 cq ce g Îmi 10,8—11,4 1 3 - I 3, Lungimea mandibu lui (la baza);*cifre n Autor Ssp. Anvergură (mm) Lungimea capului (mm) Aripă (mm) Coadă (mm) Tars (mm) o o" £ a 4) e INFLUENȚA TRAVALIULUI MECANIC ASUPRA CONȚINUTULUI DE FOSFAT ANORGANIC ȘI ORGANIC AL MUȘCHIULUI GASTROCNEMIAN DE BROASCĂ, ÎN FUNCȚIE DE MODIFICĂRILE RHOPICE ' ; DE MIRCEA I. POP și Academician EUGEN A. PORA The increase of the I<+ (Ca2 + ratio in the perfusion medium of the frog gastrocne- mius muscle, induced — after the performance of a mechanical work—a more massive accumulation of inorganic pliosphate and a more marked decrease of the organic phosphate comparatively ’with the control; the decrease of this ratio had an opposite effect, but the simultaneous increase of the two ions concentra- tions, without the mbdification of their ratio, did not significantly affect the parameters studied. TEHNICA DE LUCRU. Experiențele au fost efectuate pe 80 de broaște femele (Rana temporaria) în greutate de 90±10 g. Mușchii gastrocnemieni au fost perfuzați timp de 30 min prin arterele femurale — martorii cu ser Ringer normal, iar simetricii lor cu ser cu valoarea raportului ionic modificată, după cum urmează (23): seria I — .valoarea raportului K+/Ca2+ mărită prin creșterea concentrației K+ de 2, respectiv de 4 ori, sau prin scăderea concentrației Ca2+ de 2 ori; seria a Ii-a—valoarea raportului K+/Ca2+ micșorată prin creșterea concentrației Ca2+ de 2, respectiv de 4 ori, sau prin scăderea concentrației K+ de 2 ori; seria a III-a—concentrația K.+ și Ga2+ crescută de 2, respectiv de 4 ori, dai- valoarea raportului lor nemodificată. « în urma înregistrării simultane a ergogramelor ia o contragreutate de 200 g pentru fie- care mușchi în parte și la o frecvență de excitare de 2/s, mușchii gastrocnemieni au fost introduși imediat în zăpadă carbonică la o temperatură de — 70°C. Conținutul de fosfat anorganic a fost determinat prin metoda King (14), iar după distrugerea componentului organic cu acid percloric a fost determinat fosfatul total cu aceeași metodă. Din diferența celor două determi- nări s-a obținut conținutul de fosfat organic. REZULTATELE OBȚINUTE în seria I de experiențe, în care’ mușchii gastrocnemieni au fost perfuzați cu ser cu valoarea raportului EUCa2* mărită față de martor, ■creșterea conținutului de fosfat anorganic și scăderea fosfatului organic, în urma travaliului mecanic efectuat, sînt mai ample față de martor '(tabelul nr. 1). Rezultatele obținute în cazul măririi valorii raportului EUCa2* prin creșterea concentrației E+ sînt similare cu cele obținute prin micșorarea concentrației Ca2 +. în seria a Il-a de experiențe, în care valoarea raportului E+/Ca2+ ■a fost micșorată față de martor, creșterea conținutului de fosfat anorganic, -ST. SI CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NB. 1, P. 27-30, BUCUREȘTI, 1976 ' MIMCElA I. POP și EUGEN A. POR1A. respectiv scăderea fosfatului organic în urma travaliului, sînt mai reduse comparativ cu martorul (tabelul nr. 1). Micșorarea valorii raportului K+/ Ca2+, atît prin creșterea concentrației Ca2+, cît și prin scăderea concen- trației K+, produce același efect asupra conținutului în fosfați ai muș- chiului. în seria a IlI-a de experiențe, în care concentrațiile K+ și Ca2+ au fost crescute simultan față de martor, raportul lor rămînînd nemodificat, conținutul de fosfat anorganic și organic al mușchiuhii în urma travaliului mecanic efectuat nu suferă modificări statistic semnificative față de martor (tabelul nr. 1). Tabelul nr. 1 Influenta travaliului mecanic asupra conținutului do fosfat anorganic și organic al mnșcblulnl gastroenemlan de broască, In funcție do modificările rboplce O Tip de raport K/Ca ' Conținutul de fosfat anorganic Conținutul de fosfat organic l*g/g % | P t*g/g % P K/Ca (martor) . 2. K/Ca 762,1 ±23,4 837 ±23,4 + 9,82 <0,05 249,8±6,9 224,3±6 -10,21 <0,02 I K/Ca (martor) . 4. K/Ca 751,6±34,6 886,1 ±27,6 ±17,89 <0,02 265 ±9,8 213,3±8,1 -19,51 <0,01 K/Ca (martor) . K/4 Ca . . . . A 739 ±17 798,2 ±20,5 ± 8,01 <0,05 254,2±6,3 234,2±6,4 - 7,87 <0,05 K/Ca (martor) . K/2. Ca ... . 742,8±13,9 704,8±18,4 - 5,12 <0,05 243,1 ±4,4 256 ±5,5 ± 5,3 >0,05 II K/Ca (martor) . . K/4. Ca ... . 765,4±19,9 701 ±18,6 - 8,42 <0,05 255 ±6,5 279,8±7,9 ± 9,72 <0,05 K/Ca (martor) . 4 K/Ca . . . A 754,8±19,8 724,7±11,3 - 4,25 >0,05 240,9±6,3 253,8±5,2 ± 5,35 >0,05 III K/Ca (martor) . 2. K/2. Ca ... 730 ±13,6 733,7±21,4 ± 0,5 >0,05 247,2±6,4 245 ±5,1 - 0,89 >0,05 K/Ca (martor) . 4. K/4. Ca ... 745,3±20 755 ±17,2 ± 1,3 >0,05 258 ±7,7 254,1 ±5,4 - 1,52 >0,05 DISCUȚIA REZULTATELOR R. D. Keynes și G. W. M a i se 1 (13) au constatat că adiția K+ favorizează procesele de defosforilare în fibrele mușchilor scheletici de broască. După D. H. Paul (18), (19) efectul creșterii concentrației K+ se realizează prin acțiunea de creștere a mișcării Ca2+ în celulele mus- culare în timpul activității. A. C a r v a h 1 o și B. L e o (3) au arătat că această creștere a concentrației K+ micșorează legarea activă a Ca2+ de către reticulul sarcoplasmatic, mărind astfel cantitatea de Ca2+ liberi. Ionii de calciu, eliberați în urma excitării membranei superficiale, induc activarea simultană a- sistemului contracții și al celui glicogenolitic, 3 TRAVALIUL MECANIC ÎN FUNCȚIE DE MODIFICĂRILE RHOPICE 29 prin inducerea conversiunii fosfprilazei b în a. Astfel activarea catenei glico- litice șe cuplează cu contracția musculară. Ionii de calciu sînt necesari activării ATP-azei actomiozinice, dar activarea materialului contracții este mediată de translocarea Ga2+ intracelulari și nu prin intrarea Ca2+ externi (2). De fapt influxul Ca2+ externi în cazul creșterii concentrației Ca2+ din mediu scade foarte repede datorită scăderii permeabilității sar- colemei față de Ca2+ (9). Acțiunea dominantă a concentrațiilor crescute de Ca2+ asupra mușchiului intact este mai ales depresiunea excitabilității sub toate formele sale (8), (18). DeciCa2+ extracelulari nu joacă un rol im- portant în procesele de activare a materialului contracții, ei nefiind im- plicați direct în procesele responsabile pentru dezvoltarea tensiunii de contracție. Modificările valorii conținutului de fosfat anorganic și organic în urma travaliului mecanic efectuat de mușchii gastrocnemieni sînt în concordanță cu acțiunea modificărilor rhopice asupra travaliului (20) și asupra conținutului de glicogen și acid lactic al mușchiului (21). Astfel creșterea valorii raportului K+/Ca2+ determină o mărire a travaliului efec- tuat (4), (10), (11), (24), o scădere mai pronunțată a glicogenului muscular și o acumulare mai masivă de acid lactic (6), (12), (22), dar și o creștere a fosfatului anorganic (în medie de 11,90%) și o scădere a celui organic (în medie de 12,53%). Scăderea valorii raportului are un efect antagonist, adică o scădere a valorii travaliului mecanic (1), (7), (17), o scădere a glicogenului muscular și o acumulare de acid lactic (12), dar și o scădere a fosfatului anorganic (în medie de 5,56%) și o creștere a celui organic (în medie de 6,79%). Creșterea celor doi ioni, fără a modifica raportul dintre ei, nu influențează semnificativ parametrii amintiți (15), (16). CONCLUZII 1. Creșterea valorii raportului K/Ca (fie prin mărimea K, fie prin scăderea Ca) produce în mușchiul gastrocnemian, în timpul contracției lui, o creștere a fosfatului anorganic și o scădere a celui organic. 2. Scăderea valorii raportului K/Ca (fie prin mărirea Ca, fie prin scăderea K) provoacă modificări de sens contrar în timpul contracției gastrocnemianului, adică o micșorare a cantității de fosfat anorganic și o mărire a celui organic. 3. Creșterea cantitativă atît a K, cît și a Ca, fără a modifica valoarea raportului K/Ca, nu schimbă conținutul în fosfat anorganic sau organic al mușchiului în contracție. BIBLIOGRAFIE 1. Brecht K., Gebert G., Experientia, 1966, 82, 11, 713 — 714. 2. Caputo C., Gimenez M., J. gen. Physiol., 1967, 50, 9, 2177—2195. 3. Cahvahlo A., Leo B., J. gen. Physiol., 1967, 50, 5, 1327 — 1352. 4. Ghapman J. B., Amer. J. Physiol., 1969, 217, 3, 898—902. 5. Cier J. F., Lacour J. R., Cier A., Path. Biol., 1960, 8, 1147 — 1154. 6. Cronb C., Acta physiol. scand., 1966, 68, 1,105—117. 7. Frank G. B., J. Physiol., Lond., 1960,151, 3, 518-538. •30 MUR1CE1A. I. POP și EUGEN' A. PIOIRIAj 4 8. Frankbnhabuser B., Lannergren J., Acta physiol. scand., 1967, G9, 3, 242—254. 9. Gebbrt G., Pfliigers Arch. ges. Physiol., 1967, 296, 13, 222—233. 10. GoffartM., Ritchie J. M., J. Physiol., Lond., 1952,116, 357-371. 11. Hodgkin A. L., Horoxvicz P., J. Physiol., Lond., 1960, 153, 2, 386—403. 12. Kayb L., Mommaerts IV. F., J. gen. Physiol., 1960, 44, 405 — 413. 13. KeynesR. D., Maisbl G. W., Proc. roy. Soc., Seria B, 1954, 142, 383—392. 14. King E. J., Wooton I. D. P., Microanalysis in medical biochemistry, Pergamon Press, Londra, 1956, ed. a IlI-a, 80—81. 15. Lorkovic H., Amer. J. Physiol., 1959, 196, 666. 16. LOttgau H. C., J. Physiol., Lond., 1963, 168, 679. 17. Oniani T. H„ Djibladzb S. V., Untadze A., Fiziol. jivot. SSSR, 1967, 53, 5, 557 — 562. 18. Paul D. H., J. Physiol., Lond., 1960, 151, 3, 566-577. 19. Paul D. H., J. Physiol., Lond., 1961, 155, 2, 358-371. 20. Pop M. L, Pora E. A., St. cerc, biol., Seria zoologie, 1973, 25, 6, 533 — 537. 21. Pop M. I., Pora E. A., St. cerc, biol., 1974, 26, 4, 257-259. 22. Pora E. A., Stoicovici Fl., St. cerc, biol., Seria biol, anim., 1963,14,1,113 — 120. 23. Pora E. A., Rev. roum. Biol., Sirie de Zoologie, 1966, 11, 2, 77 — 110. 24. Sandow A., Kahn A. J., J. cell comp. Physiol., 1952, 40, 89. Institutul pedagogic Oradea, Calea Armatei Roșii nr. 5 ?i Centrul de cercetări biologice Cluj-Napoca, Str. Clinicilor nr. 5—7. Primit în redacție la 14 iulie 1975. RANDAMENTUL EOSFORILĂRII OXIDATIVE ÎN MITOCONDRIILE MUȘCHIULUI NETED INTESTINAL DE IEPURE DE MARGARETA NISTOR și MARIA-LUIZA FLONTA * The efficiency of oxidative phosphorylation has been studied in the mitochon- drial suspension of the rabbit ileum smooth muscle. In the presence of the succinate, as substrate for oxidation, the P : O ratio was 1. 53 in the first 15 minutes, diminishing dovm to 0.19 within 30 minutes. In the presence of 30 mM FNa, a marked decrease of the oxidative capacity and discoupling of phosphorylation vere observed. FNa had no effect upon the ATP-ase activity of the ileum smooth muscle mitochondria. The purity and integrity of the mitochondria were als’o controlled by electron- microscopic observations. Din literatură (3), (12), (14), (15), precum și din cercetări personale (9) reiese că activitatea mecanică a musculaturii netede intestinale a ani- malelor homeoterme este puternic afectată de hipoxie. Legat de aceasta ni s-a părut interesant să cercetăm dacă nu există o corelație între feno- menele observate în activitatea motorie și capacitatea de refacere a poten- țialului energetic prin fosforilare oxidativă. în această primă notă, pre- zentăm datele obținute asupra fosforilării oxidative în mitocondriile mușchiului neted intestinal de iepure în condiții de normoxie. MATERIAL ȘI METODE S-a lucrat pe iepuri de rasă Chinchilla, în greutate de 2—3 kg ă jeun de 20 de ore. După sacrificare, prin lovire în regiunea bulbară, se preleva un segment de ileon de circa 50 cm lungime. După cîteva spălări ale lumenului cu soluție Krebs rece, fragmentelor de intestin plasate pe gheață li se îndepărta mucoasa. Țesutul muscular era spălat în soluție de zaharoză — EDTA — Tris HC1 rece, uscat pe hîrtie de filtru și apoi cîntărit. S-a lucrat în medie cu 6 g mușchi intestinal. Mitocondriile s-au izolat printr-o metodă modificată, după D. G a u t h e r o n și colab. (4), in zaharoză 0,25 M, EDTA 0,001 M, tamponată cu Tris HC1 0,01 M la pH 7,4, la 11 000 t/min și 0°C. Suspensia finală , conținea 5,5—8,7 mg proteină mitocondrială/inl. ■ Consumul de oxigen s-a determinat prin tehnica Warburg la 30°C (faza gazoasă-aer). Mediul de reacție conținea într-un volum de 2 ml: KC1—50mM; MgCl26H2O —5 mM; tampon fosfat de potasiu pH 7,4 — 20 mM ; EDTA— 1 mM; ATP —Naz—1 mM ; ADP — Na3—2,5 mM; zaharoză —50 mM; succinat—10 mM ; glucoza —40 mM; hexochinază—3 mg (120 u.i.); sus- pensie mitocondrială (conținînd în medie 1,8 mg proteină) —0,25 ml; FNa —30 mM. Fosforul anorganic a fost dozat după metoda Fiske-Subbarow (2), iar concentrația pro- teică după metoda Lowry și colab. (6). Consumul de oxigen (—AO) exprimat în atomi/mg proteină/h și consumul de fosfor (—AP) exprimat în |x moli/mg proteină/h au servit la calcu- larea raportului P : O. * Cu ajutorul tehnic al tov. Eugenia Cotea. ST. ȘI CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NR. 1, P. 31-35, BUCUREȘTI, 1976- 32 MABlGARETA NISTOR și MAiRlîlA-lUUIZA FLONTtA j; Activitatea ATP-azei, exprimată prin numărul de țz moli fosfor/mg proteină/h eliberați prin hidroliza ATP, a fost măsurată în suspensia mitocondrială incubată la 30°C și pH 7,4, într-un mediu izotonic conținînd : KC1—50 mM; MgGI26H2O —5 mM; EDTA —1 mM; ATP — Na2—1 mM; zaharoză—50 mM; Tris HC1—50 mM; FNa —30 mM, suspensie de mitocon. drii—0,25 ml. Dozările de fosfor au fost realizate după 15 și 30 min incubație. Puritatea și integritatea mitocond riilor au fost verificate și prin examen electrono- microscopic. Sedimentul de mitocondrii a fost fixat în glutaraldehidă 2,5% și apoi în OsO4 1% iar după deshidratare în acetonă și incluzionat în Vestopal. Secțiunile ultrafine au fost exami. nate la microscopul electronic JEM —7. REZULTATE Observațiile eleetrono-microseopice. Suspensia mitocondrială (fig. 1) este relativ pură, conținînd, alături de mitocondrii, resturi de membrană celulară, microzomi și lizozomi. Majoritatea mitocondriilor apar în formă condensată; există și forme dilatate cu aspect de liză hipoosmotică; nu apare forma clasică. Fosforilarea oxidativă în prezența succinatului ca substrat al oxidării, Efectul fluorurii. După cum se remarcă din tabelul nr. 1, rata consumului de oxigen crește, atît la probă cît și la control, la 30 min de incubații Tabelul nr. 1 Randamentul fosforilării osidative In mitocondrlile de mușchi neted intestinal do iepure in prezența (proba-P) și in absența FNa (controi-C) in mediul de incubație Nr. expe- riențe Timp de incubație (min) 15 30 -AO țz at/mg/h -AP țz moli/mg/h P: O -AO țz at/mg/h — AP jz moli/mg/h P : O P C P | C P G P G P C P c 1 -0,83 -1,65 ±3,9 -2,56 • 1,55 -2,1 -2,92 ±2,7 -0,26 0,01 2 -1,20 -2,18 ±0,79 -4,06 — 1,86 -4,04 -5,07 ±3,06 -0,89 — o,l' 3 -0,67 — i,22 ±6,50 -1,54 — 1,26 -1,80 -5,70 ±0,71 -0,80 0,2( 4 -0,52 -1,22 ±2,06 -1,34 - — 1,09 -2,2 — 3,84 ±2,27 —0,92 — 0,21 5 -0,70 -1,30 ±2,22 -2,10 — 1,61 -0,94 -3,27 ±3,64 -1,07 — 0,31 M -0,78 -1,51 ±3,09 -2,32 1,53 -2,22 -4,16 ±2,47 -0,79 —. 0,11 ± Sm ±0,11 ±0,17 ±0,98 ±0,48 ±0,13 ±0,51 ±0,28 ±0,50 ±0,13 ±0,0' Dif. O/ /o 48,4 100 46,7 100 p P < 0,01 p < 0,01 față de primele 15 min. Capacitatea oxidativă în prezența FNa este mul redusă (p < 0,01), în timp ce capacitatea de fosforilare este complel deprimată. în lipsa fluorurii, raportul P : O este la 15 min de 1,53. Eficienți fosforilării oxidative scade pînă la P : O = 0,19 după 30 min incubației legat de reducerea marcată a ratei consumului de fosfor: 3 FOSTORILARflA OXTDATtVĂ ÎN, liWȘmiltJin’NSnW 3â în condiții experimentale similare (t, pH, concentrația proteică), prezența fluorurii nu influențează semnificativ, după cum se remarcă din tabelul nr. 2, activitatea ATP-azei mitocondriilor de mușchi neted intes- tinal» Tabelul nr. 2 Activitatea ATP-azică a mitocondriilor mușchiului neted intestinal de iepure n (3)* . Pa eliberat (p moli/mg prot. /h) + FNa — FNa Timp de incubație (min) 15 30 15 30 M±Sm . 0,55±0,03 0,74±0,04 0,59±0,04 0,77,±0,06 * Numărul de determinări efectuate. DISCUȚțl Dificultățile tehnice, exprimate în primul rînd prin numărul mai redus de mitocondrii al mușchiului neted, faptul că acestea sînt mai „slab cuplate” decît cele hepatice, de exemplu, explică parțial cunoștințele extrem de reduse pe care le avem cu privire la capacitatea mușchiului neted de a stoca energia substratelor oxidate în ATP. Astfel prima cercetare în care se realizează izolarea de mitocondrii dintr-un mușchi neted este cea efectuată în 1961 de D. G a u t h e r o n și colab. (4), care izolează mitocondriile din mușchiul uterin de porc și cercetează proprietățile lor oxido-fosforilante. Observațiile noastre electrono-microscopice confirmă pe cele ale lui N. L. S t e p h e n s și K. Wrogemann (13), efectuate asupramitocon- driilor de mușchi neted traheal, și anume că, în comparație cu suspensiile mitocondriale din mușchiul scheletic, contaminarea cu material nemito- : condrial este mai mare în suspensiile mușchiului neted. Ca și la autorii citați, forma predominantă în care apar mitocondriile este cea condensată. Determinările de concentrație proteică mitocondrială au confirmat de asemenea datele din literatură (4), (13) cu privire la randamentul mai scăzut al mușchiului neted în ceea ce privește numărul de mitocondrii. în cercetările asupra proceselor de fosforilare oxidativă se utilizează frecvent fluorură, ca inhibitor al activității ATP-azice, activitate care poate masca valorile reale ale raportului P : O. Experiențele noastre, în care s-a urmărit eficiența fosforilării oxi- dative în probe paralele (care conțineau sau, dimpotrivă, erau lipsite de FNa în mediul de incubație), au arătat că fluorură exercită o deprimare de circa 47,5% asupra consumului de oxigen și o deprimare totală a fosfo- rilării. Rezultatele noastre concordă cu cele ale lui K. R, R e e s (10), H. B. C o h e n (1), D. G a u t h e r o n și colab. (4), H. J. M e r s m a n n și 0. A. P r i v i t e r a (7), R. W h i 11 a m și colab. (16), care semna- lează o deprimare de 40—50% a consumului de oxigen și o scădere im- portantă a fosforilării, și parțial cu cele ale lui C. G u r b a n și E. Cri s- ’tea (5), care evidențiază influența inhibitoare a F- asupra respirației în prezența succinatului. '3 - c, «78 34 MlARjGiAiRETtA NHSWOH și MAJffilX-ianZA. FLONTA 4 i Datele obținute de noi prin măsurarea activității ATP-azice vin în sprijinul observațiilor de mai sus. Astfel, fluorura nu a avut nici un efect asupra ratei fosforului anorganic eliberat în mediul de incubație prin hidroliza ATP, fapt confirmat și de cercetările lui D. K. Myers și E. C. S1 a t e r (8), care arată că, în concentrațiile utilizate în studiul fosforilării oxidative, F" nu are un efect semnificativ asupra ATP-azelor mitocondriale în prezența Mg8+ și EDTA. Dacă acțiunea fluorurii asupra capacității oxidative mitocondriale în prezența succinatului o putem explica prin influența inhibitoare asupra succindehidrogenazei (11), dacă nu ne surprinde lipsa unei eficiențe mai mari a fosforilării oxidative, explicabilă în absența unei acțiuni inhibitorii asupra activității ATP-azice, nu ne putem însă explica deocamdată decuplarea totală a fosforilării, mergînd pînă la apariția unei cantități însemnate de fosfor anorganic. în lipsa fluorurii, randamentul fosforilării oxidative în prezența succinatului, reprezentat prin valoarea raportului P : O = 1,53 (la 15 min de incubație), se raliază valorilor semnalate în literatură pentru mitocondriile hepatice și este superior valorilor menționate de D. Gautheron și colab. (4) pe mitocondrii de mușchi uterin (P : O = 0,82) și de N. L. Stephens și K. Wrogemann (13) pe mușchi traheal (ADP : O = 1,3). Capacitatea de fosforilare scade puternic după 15 min, ca urmare; a creșterii activității ATP-azice, trăsătură caracteristică mitocondriilor, „slab cuplate”, în categoria cărora, pe lîngă sarcozomii miocardici, credem că se pot încadra și mitocondriile mușchilor netezi. 5 FOSFOHILAtRElA OXEDATIiVĂ IN MUȘICHIUIL MOTtEfD DE EPURE 35 7. Mbrsmann H. J., Privitera G. A., Amer. J. Physiol., 1964, 206, S, 980 — 984. 8. Myers D. K., SlaterE. G., Biocheni. J., 1957,67,4, 558—563. 9. NistorM., NicoarX D., St. cerc, biol., Seria zoologie, 1972, 24,1, 53—68. 10. Rees K. R., Biochem. J., 1954, 58, 2, 196. 11. SlaterE. C., Bonner W. D., Biochem. J., 1952, 52, 2,185. 12. Smith D. J., Vane J. R., J. Physiol., 1966,186, 284-296. 13. Stephens N. L., Wrogemann K., Amer. J. Physiol,, 1970, 219, 6, 1796—1801. 14. Șanta N., Gurban C., Rev. Biol., 1961, 6, 61 — 69. 15, WestT. C., Hadden G., Farah A., Amer. J. Physiol., 1951,164, 565. 16. Whittam R., Bartley W,, Weber G., Biochem. J., 1955, 59, 4, 590. Facultatea de biologie, Catedra de ecologte-fiziologte animală-biochimie București 35, Splaiul Independenței nr. 91 — 95. Primit în redacție la 14 iulie 1975. CONCLUZII 1. în prezența succinatului ca substrat al oxidării, raportul P : O al mitocondriilor mușchiului neted intestinal de iepure este de 1,53 în primele; 15 min de incubație. 2. Eficiența fosforilării oxidative scade pînă la valoarea P : O = 0,19 după 30 min de incubație, ca urmare a scăderii marcate a capacității de fosforilare. 3. FNa (30mM) nu influențează semnificativ activitatea ATP-azică a suspensiei mitocondriale. 4. FNa exercită o acțiune deprimantă atît asupra oxidării succina- tului, cît și asupra capacității de fosforilare. BIBLIOGRAFIE 1. Cohen H. B., Arch. Biochem. Biophys., 1961, 92, 449 — 461. 2. Fiske C. H., Subbarow J., J. biol. Chem., 1925, 66,2, 375—400. 3. Furchgott R., ShorE., Amer. J. Physiol., 1950,162, 88—92. 4. Gautheron D., Gaudemer Y.» Zajdela F,, Bull. Soc. Chim, biol., 1961, .4,3, 1, 193 — 199. 5. Gurban C., Cristea E., St. cerc, biochim,, 1964, 7,7, 57 — 67. !, 6. Lowry O. H., R6sebrough N. J., Fobr Ă. L., Randall R. Y., J. biol. Chem., 1951, 193, li 265-275. ; VARIAȚIA COLESTEROLULUI SANGUIN DUPĂ SPLENECTOMIE LA PUII DE GĂINĂ DE RODICA GIURGEA The spîenectomy of 5-week-old Studler chickens elicits in the first week a 16% (p < 0.001) decrease of the blood cholesterol content, followed after 3 weeks by the normalization of its value. Datele din literatură arată că la mamifere splina intervine în sin- teza colesterolului, constituind totodată și un organ de depozitare a aces- tuia (7). în prezenta lucrare redăm rezultatele privind efectul splenectomiei asupra colesterolului sanguin la puii de găină. MATERIAL ȘI METODE S-a lucrat pe pui de găină Studler, rezultați din părinți din import, grupați în două loturi: un lot martor și un lot splenectomizat. Loturile au fost formate fiecare din 8 pui, care au fost crescuți în condiții de laborator și hrăniți cu furaj concentrat, adecvat vîrstei lor. Splenectomia a fost practicată la vîrsta de 5 săptămîni, după o metodă personală (4). Puii din lotul martor au fost supuși unei operații false. Sacrificarea animalelor a avut loc la 1, respectiv 3 săptămîni după operație, prin decapitare, iar din sîngele recoltat a fost deter- minat colesterolul total după metodă Zak (10), valorile obținute fiind exprimate în mg%. Rezultatele calculate statistic, după metoda Student, sînt redate în tabelul nr. 1. o REZULTATE ȘI DISCUȚII Splenectomia are ca rezultat scăderea colesterolului sanguin cu 16% (p < 0,001) la o săptămînă, revenind spre normal la 3 săptămîni după operație, cînd atinge —3% față de martor (p—nesemnificativ) (tabelul nr.l). Scăderea colesterolului din sînge după splenectomie ar putea fi cauza a numeroși factori. Astfel după unii autori splina pune la dispoziția sîngelui un produs de secreție internă cu acțiune colesterogenă (7). După alții, splenectomia are ca rezultat modificarea activității unor glande endocrine, care influențează metabolismul grăsimilor. Astfel în tiroidă, splenectomia determină modificări structurale și ponderale de tip hiper- plazic(l). înseamnă că hiperfuncția tiroidiană intensifică latura energetică a metabolismului lipidic, deci modifică colesterogeneza. Rolul suprarenalei în conținutul de colesterol din sînge este, de asemenea, un fapt cunoscut, creșterea acidului ascorbic fiind paralelă cu aceea a colesterolemiei și invers. Acest lucru l-am demonstrat anterior (6), cînd, după splenectomia puilor de găină am înregistrat o scădere a acidului ascorbic din suprarenală. Participarea suprarenalei la metabolismul ST. SI CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NR. 1, P. 37-38, BUCUREȘTI, 1976 38 BOOMCA GIUWGEIA. 2 colesterolului este explicată, pe de o parte, prin sinteza acestui produs în glanda respectivă, iar pe de altă parte prin faptul că în suprarenală există un ,,pool” de colesterol, utilizat în sinteza steroizilor (2), (9). Tabelul nr. 1 Variația colesterolului sanguin la puii do splenectomlzațl (mg%) Sacrificări Valori Martor Splenectomizat Media 432 365 ±ES 2,45 5,06 1 n 8 6 săptămînă ±% — - 16 p — < 0,001 Media 423 412 ±ES 10,63 9,80 3 n 8 8 săptămîni ±% — 3 p — — în modificarea colesterolului din sînge după splenectomie poate fi implicat și sistemul limfatic. Se cunoaște în acest sens că hidrolizatul timic modifică lipidele totale și colesterolul din ficat, mușchi, creier (8). în același sens J. C o m ș a și J. L e r o u x (3) arată că extractul timic determină o creștere importantă a lipidelor totale și colesterolului în suprarenală. Splenectomia provoacă modificarea reactivității timusului la iepuri (1), iar la puii de găină atît în timus cît și în bursa lui Fabricius apar modificări biochimice care caracterizează un catabolism intens (5). Cu toate că păsările prezintă uh metabolism mai intens decît mamife- rele, constatăm însă că modificările ce se produc după eliminarea splinei, cel puțin în privința acestui indice, sînt asemănătoare cu cele cunoscute la mamifere. în concluzie, îndepărtarea splinei la 5 săptămîni după ecloziune, la puii de găină, determină o scădere a colesterolului sanguin în prima săptămînă după operație, urmată de o revenire spre normal la trei săptă- mîni. BIBLIOGRAFIE 1. Athanasiu A., St. cerc, endocrinei., 1969, 20, 1, 15. 2. Best C. H., Taylor N. B., Bazele fiziologice ale practicii medicale, Edit. medicală, București, 1958. 3. Comșa J., Leroux J., Endocrinologie, 1955, 13, I, 17. 4. Duca C. , Rusu M., Giurgea R., Lucr. șt. Inst. agron. ,,Dr. P. Groza”, Seria med. vet. și zootehn. (Cluj), 1971, 27, 81. 5. Giurgea R., Zbl. Vet. Med., 1973, A, 20, 677. 6. Giurgea R., Pora E. A., St. cerc, biol., Seria zoologie, 1973, 25,1, 45. 7. Jitariu P., Topală. N., Leporda Gh., Anal. șt. Univ. „Al. I. Cuza” Iași, Secția a II-a, Șt. nat., 1958, 4, 2, 247. \ 8. Parhon C. I., Wernbr G., Bull. M6m. Sect, Endocrin., 1973, 6, 175. 9. Samuels L. T., Biogenesis of androgens, Vtb Intern. Congr. Biochem., Moscova, 10—16, . august 1961, Symp. VII, 1961, 745. 10. Zak B., Amer J. clin. Path., 1954, 24, 1307. Centrul de cercetări biologice Cluj-Napoca, Str. Clinicilor nr. 5—1. Primit în redacție la 4 aprilie 1974. BADIOFOSFOCAPTAREA OVIDUCTULUI DE GĂINĂ PE PARCURSUL UNUI CICLU FUNCȚIONAL DE CORNELIA DUCA, Z. URAY și ECATERINA ANGI The authors proposed to study the metabolic level of the oviduct using the total radiophosphorus intake as a test. The phosphoric collection was constantly increased opposite to the control group (unlaying), reaching the highest levels in the uterus. The results are discussed according to the oviduct segment and the position of the egg. Studii anterioare (9) au stabilit modul de încorporare a radiofosforu- lui în ovar și unele segmente ale oviductului, la intervale variabile de la injectarea lui. Pornind de la aceste cercetări, ne-am propus să determinăm în mod dinamic modificările metabolice în toate segmentele oviductului, în cursul unui ciclu funcțional. MATERIAL ȘI METODĂ S-a lucrat pe găini adulte rasa Leghorn alb, în plină perioadă de ouat (51 de săptămîni), cu o greutate de 1,500 kg, ținute în condiții standard de combinat. Animalele au fost împărțite în patru loturi, în funcție de poziția oului în oviduct. Astfel, lotul I cuprindea găini aflate la 6 oră și jumătate, lotul II la patru ore și jumătate, iar lotul III la 21 de ore de la ovipoziția precedentă. Lotul IV, martor, cuprindea găini fără ou în curs de formare. S-a injectat în vena ăxilară soluția izotonică de radiofosfor (32PO4H Na2) la pH neutru, 0,2 țiCi/g greutate corporală. La 90 min de la injectare s-a făcut sacrificarea, recoltîndu-sc sînge pe heparină din vena jugu- lară. S-au prelevat fragmente din diversele segmente ale oviductului. Pentru magnum, recol- tările s-au făcut din porțiunea proximală, mijlocie și distală (cu indicativele 2, 3, 4 în tabelul nr. 1). De asemenea, srau recoltat fragmente din ficat, atît pentru a urmări în paralel un organ cu nivel metabolic ridicat, cît și pentru a stabili relația dintre funcțiile hepatice și. formarea oului. După hidroliza țesuturilor (100 mg țesut în 1 ml KOH 1 N), acestea au fost luate pe ținte de aluminiu 0,1 ml, măsurîndu-li-se după uscare radioactivitatea. Probele au fost măsu- rate cu un contor Geiger-Muller, cu o fereastră terminală, tip VAZ, cuplat la un aparat elec- tronic de numărat impulsuri, tip B2. i Rezultatele, exprimate în impulșuri/minut din 100 mg de țesut au fost calculate în coefi- ciente (4) și raportate la radioactivitatea unei cantități de 0,1 ml plasmă, după formula ur- mătoare : fi 1 nt imp./min a 100 mg organ — imp./min a 0,1 ml plasmă organ/plasmă st; ȘI CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NR. 1, P. 39-42, BUCUREȘTI, 1976 41 40 COraNELIiA DUIOA și CO0UAWRIA.TORI REZULTATE ȘI DISCUȚII Rezultatele încorporării. globale a radiofosforului în oviductul de găină în timpulunui ciclu funcțional sînt date în tabelul nr. 1. Analiza lor arată că segmentele oviductului se comportă diferit în cursul ciclului. Astfel, fosfocaptarea în infundibul, magnum, istm și vagin se plasează în general la un prag mai scăzut, în vreme ce uterul încorporează pe tot parcursul ciclului cantități evident mai ridicate de radiofosfor. La nivelul diverselor porțiuni ale magnumului se constată cele mai crescute valori în porțiunile deja parcurse de ou. Astfel, în cazul lotului I, porțiunea cranială și cea mijlocie prezintă valori semnificativ crescute față de martor (p < 0,001). în cazul lotului TI valoarea cea mai scăzută a fosfo- s captării o întîlnim în prezența oului. în acest timp, porțiunile magnumului, deja golite de secreție, se păstrează la nivele ridicate, înregistrînd valori semnificative în porțiunea cranială și cea caudală (p < 0,001). Spre deosebire de magnum și istm, în uter întîlnim cel mai ridicat nivel de fosfocaptare în toate perioadele ciclului funcțional și chiar în cazul martorului. Aceste valori sînt semnificative, atingînd maximul în cazul lotului III. Fosfocaptarea ridicată din uter arată că în acest segment este cea mai intensă activitatea energetică din oviduct. Rezultatele subli- niază că procesul de transfer al ionilor din fluidul uterin spre ou, precum și calcificarea cojii, necesită cantități mari de energie. Creșterea progresivă a cantității de radiofosfor, începînd cu lotul I spre lotul III, sugerează o înmagazinare treptată a fosforului în moleculele de adenozintrifosfat, probabil și creatinfosfat, atît în celulele componente ale mucoasei uterului, cît și în miocitele bine reprezentate în acest segment. în cazul lotului II, înmagazinarea radiofosforului concordă cu un nivel ridicat al respirației tisulare (3), (7), (8), ca expresie concludentă a cuplării fosf orii arilor cu reacțiile de oxidare. Este foarte probabil că, în perioada premergătoare calcificării, uterul să-și formeze rezerve de energie. Potențialul energetic este consumat în cursul calcificării și al tuturor proceselor care însoțesc acest fenomen. Legat de problema fosfocaptării uterine ridicate, mai intră în discuție transferul de fosfor ca element constituent al albușului și cojii. Astfel,? proveniența fosforului din albuș (3,7 mg/total albuș (2)) se datorește, probabil, în cea mai mare măsură transferului de la nivelul uterului. în ceea ce privește cantitățile mici de fosfor din coajă, ele au o proveniență’ exclusiv uterină. . Faptul că valorile fosfocaptării sînt cele mai mari în cazul lotului III se poate explica nu numai prin încorporarea P în țesutul uterin, ci mai’ ales prin asocierea cu un debit arterial mult crescut în acest moment (5). Or, se știe că sîngele conține nu numai ioni de fosfat, care însoțesc calciul necesar calcificării, ci și fosfoproteine, specifice găinilor ouătoare, fosvitina (cu 10 % fosfor) (1), (6). în magnum, nivelele de încorporare sînt mai joase, în comparație cu celelalte segmente ale oviductului. Cu toate acestea, diferențele față de! găinile neouătoare se mențin în general semnificative. ! Ca o particularitate pentru magnum remarcăm existența unei fosfocaptări variabile de-a lungul porțiunilor sale. Astfel, porțiunile stră-i 42 CQHNIEMA1 DUMA și COOUABOIRIATOBI 4 bătute deja de ou înregistrează valorile cele mai mari. Acest fapt îl putem corela cu sintezele proteice, care se intensifică imediat ce a trecut oul. Mai mult chiar, este posibil ca valorile ridicate de fosfocaptare să se dato- reze și încorporării izotopului în acizii nucleici, supuși și ei fluctuațiilor în decursul urnii ciclu funcțional. Faptul că martorul înregistrează nivelele cele mai joase de încorpo- rare dovedește nevoile reduse energetice ale organului în pauzele de sinteză proteică. în ceea ce privește fosfocaptarea hepatică, se constată creșterea ei progresivă de la lotul I la lotul III. Aceasta este în concordanță cu opiniile unor autori (2), (10) care susțin că fosfoproteinele și fosfolipidele gălbenu- șuui sînt sintetizate de către ficat și transportate pe cale sanguină la ovar. O depozitare masivă a fosfoproteinelor în ovar pentru formarea foliculului următor duce la epuizarea temporară a acestora în ficat. Pe măsură ce foliculul se formează, cantitatea de fosfor din ficat crește, ajungînd la valori maxime spre sfîrșitul ciclului. BIBLIOGRAFIE 1. Bauman W., 13th Wld’s Poultry Gongress, Kiev, 1966, 324—327. 2. Bell D. J., Freeman B. M., Physiology and biochemistry of the domestic foud, Acad. Press, Londra — New York, 1971. 3. Brown W. O., Badman H. G., Poultry Soi., 1962, 12, 654 — 657. 4. Derevenco P., Derevenco Vera , Uray Z., Axente Viorica, Fiziol. norm. pat., 1969, 15, 29-37. 5. Duca Cornelia, Imreh L, Uray Z., St. cerc, biol., Seria biol, anim., 1975, 27, 2, 137 — 140. 6. Heald P. J., Mc Lachlan P. M., Biochem. .L, 1965, 94, 32 —39. 7. Kemeny A., Fodor E., Lbncses Gy., Acta vet. Hung., 1969,19, 417 — 425. 8. Misra M. S., Kemeny A., Acta vet. Hung., 1964,14, 389—398. 9. Roșca D. I., PoraE. A., RușdeaDelia, St. cerc. biol. Cluj, 1961, 2, 253—258. 01 Roșca D. I., Rușdea D., Stoicovici Fl., Fabian N., Deaciuc I. V., Studia Univ. „Babeș- Bolyai”, Seria Biologica, 1963, 125 —137. Institutul agronomic ,,Dr. Petru Groza” Cluj-Napoca, Sir. Mlnășlur nr. 3 Și Institutul oncologic Cluj-Napoca, Str. Republicii nr. 44. Primit lă redacție la 10 aprilie 1974. INFLUENȚA CÎMPULUI MAGNETIC ASUPRA TIMUSULUI LA PUII DE GĂINĂ DE N. NEAGA, M. LAZĂR și A. NEGREA Chickens were treated with a 300 Oe magnetic field during the first 10 days after hatching. The treatment led to histological modifications of the thymus, characterized by: decrease of the cortical zone and increase of the medullar one, associated w Ith increase of the number of epithelial cells. La păsări, timusul este format din lobi mici, inegali, fusiformi sau lenticulari, dispuși cervical, de o parte și de alta a liniei mediane. După ecloziune, timusul are o evoluție rapidă, continuînd să crească pînă la apariția maturității sexuale; apoi, suferă o involuție lentă dar persistă în organism toată viața păsării (1). Involuția timusului, însă, poate fi influențată și de acțiunea unor factori, ca factorii de stress (temperatura scăzută, alimentația carențată etc.), agenții infecțioși etc. (1), (2), (10). Cîmpul magnetic acționînd asupra organismului animal produce modi- ficări fiziologice (3) și modificări histologice la nivelul sistemului nervos (4), al glandelor endocrine (6), (12) și al organelor limfo-epiteliale (7). Ținînd seama de importanța timusului în perioada de creștere și de faptul că el poate fi influențat de acțiunea unor factori (1), (2), (5), (10), (11), în lucrarea de față prezentăm acțiunea cîmpului magnetic asupra structurii histologice a timusului la puii de găină. MATERIAL ȘI METODĂ Experiența a fost efectuată pe pui de găină din rasa Rock alb, care au fost impăr- țiți In două loturi: un lot martor și un lot tratat cu cîmp magnetic. Tratarea puilor cu cîmp magnetic s-a făcut în primele 10 zile după ecloziune, zilnic cîte o ședință de 20 min. Cimpul magnetic folosit a fost de tip pulsator și a avut intensitatea de 300 Oe. în perioada experimentală au fost asigurate aceleași condiții de Întreținere și furajare pentru toți puii. . La vîrstele de 30,45 și 60 de zile au fost sacrificați cîte trei pui din fiecare lot, recoltîn- du-li-se fragmente de timus. Acestea au urmat tehnica histologică obișnuită, iar secțiunile exe- cutate aii fost colorate după metoda tricromică. ! REZULTATELE OBȚINUTE Examinînd aspectul histologic al timusului la puii din lotul martor (a vîrsta de 30 de zile, se constată că țesutul propriu-zis al organului este Repartizat în lobi, iar în cadrul fiecărui lob în lobuli. în structura lobulului JT. SI CERO. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NR. 1, P. 43 - 45, BUCUREȘTI, 1976 44 N NEAGA și COLABORATORI 2 ? timic se observă două zone bine delimitate, și anume una corticală mai omogenă și mai întunecată, în care se găsesc multe timocite și puține celule epiteliale, și alta medulară mai puțin omogenă și mai clară, în care se găsesc mai puține timocite și mai multe celule epiteliale (fig. 1). , La vîrsta de 45 de zile, cele două zone sînt de asemenea bine delimitate, iar celulele epiteliale se găsesc atît în corticală, cît și în medulară, unde ; sînt grupate sub formă de insule. La vîrsta de .60 de zile corticala este bine delimitată, iar celulele epiteliale sînt izolate, în timp ce medulara este mai clară și conține insule de celule epiteliale (fig. 2). Examinînd aspectul histologic al timusului la puii tratați cu cîmp magnetic, la 30 de zile se constată o slabă delimitare între cele două zone,: Zona corticală este mult redusă față de cea medulară și conține puține celule epiteliale, iar zona medulară este bine dezvoltată și conține un număr mare; de celule epiteliale, izolate sau grupate sub formă de insule (fig. 3). La vîrsta de 45 de zile, cele două zone sînt slab delimitate; zona; corticală este redusă și conține puține celule epiteliale, iar zona medulară este bine dezvoltată și conține multe celule epiteliale grupate. La vîrsta de' 60 de zile, aspectul este asemănător cu cel de la 45 de zile, respectiv cele două zone sînt bine delimitate, iar celulele epiteliale;! sînt puține în corticală și numeroase în medulară (fig. 4). • î Menționăm că nu s-au găsit corpusculi Hassal la nici unul din loturi; și la nici o vîrstă. DISCUȚIA REZULTATELOR Timusul are un rol deosebit de important în organism, atît datorită! acțiunilor sale multiple, cît și corelațiilor sale funcționale cu glandele endocrine (1), (2), (5), (8), (9), (10), (11). Astfel, timusul stimulează crește^ rea, produce timocitele și participă la procesele de imunitate ale organis- mului (1), (5), (10). De asemenea, timusul are importante interpelații func] ționale cu hipofiza (1), (5), cu tiroida (1), (5), (11) și cu gonadele (1), (5). (10), (11). Dar, aceste interrelații au un caracter diferit, caracter cari; depinde, pe de o parte, de factorii care îl influențează, iar pe de altă partț de hormonii secretați de aceste glande. Astfel, sub acțiunea factorilojj stressanți de orice natură, hipofiza secretă o cantitate sporită de ACTHS iar acesta, acționînd asupra corticosuprarenalei, determină o secreție sporită de hormoni corticoizi. Hipersecreția de hormoni corticoizi product] involuția timusului (1), (5), (10); în schimb, stimularea tiroidei (10), injeo; tarea de tiroxină (1), hipersecreția de hormonjsomătotrop (1), (10), (11' și hipofuncția gonadelor (10), (11) produc stimularea timusului. ] Aspectul de stimulare a timusului se caracterizează printr-o ușoarl creștere în greutate a glandei). iar microscopic prin creșterea numărului de celule epiteliale, care sînt dispuse în cuiburi (5), (10). Deși asupra funcțiilor timusului există încă multe aspecte nelămu, rite, iar calitatea sa. de glandă endocrină este pusă la îndoială de mul] autori, totuși există multe date care demonstrează că, pe lîngă alte acțiuni; timusul are și acțiune endocrină. Astfel, E. A. P o r a și colab. (8), (9]i bazați pe interrelațiile funcționale, involuția normală și accidentală, consi) Fig. 1. — Secțiune prin timus, pui martor la 30 de zile. C, Zona corticală; M, zona medulară; li, celule epiteliale (colorație tricromică, microfoto 10 X 40). I-ig. 2. Secțiune prin timus, pui martor la 60 de zile (colorație tiicromică, microfoto 10x40). CÎMPIUIL iMĂGiNIEmlC ȘiE TIMUISUIL DA PUH DIE GĂINA. 45 Fig. — Secțiune prin timus, pui la 30 de zile, tratat cu cîmp magnetic. Se observă un număr mare de celule epite- liale în medulară (colorație tricromică, microfoto 10 x 40). deră că locul timusului este printre glandele cu secreție internă. De ase- menea, Șt.-M. M i 1 c u și A1. L u n g u (5) consideră că timusul are un rol activ în lanțul reacțiilor neuroendocrine de adaptare a organismului, unde-și asigură participarea printr-un mecanism hormonal iar activitatea sa endocrină este legată de celulele epiteliale, la nivelul cărora apar modificări histochimice caracteristice pentru activitatea secretorie. Modificările histologice constatate de noi la puii tratați cu cîmp magnetic, respectiv creșterea evidentă a numărului de celule epiteliale și dispunerea lor sub formă de insule, sînt aspecte caracteristice de stimulare (10) și ele demonstrează că acțiunea cîmpului magnetic are efect stimulant asupra timusului. Aceste rezultate sînt în acord cu rezultatele noastre anterioare (6), (7) și cu cele obținute de A. M. Zi r r a și colab. (12), care au arătat că acțiunea cîmpului magnetic asupra organismului animal produce modificări histologice la nivelul glandelor endocrine (6), (12) și la nivelul organelor limfoepiteliale (7). CONCLUZII 1. Tratarea puilor de găină cu cîmp magnetic de 300 Oe, în primele 10 zile după ecloziune, produce modificări histologice în timus. 2. Modificările histologice sînt caracterizate prin reducerea zonei corticale și creșterea zonei medulare, însoțită de creșterea numărului de celule epiteliale. 3. Modificările se mențin pînă la vîrsta de 60 de zile. Fig. 4. — Secțiune prin timus, pui la £0 de zile, tratat cu cîmp magnetic. Se observă numeroase celule epiteliale în medulară (colorație tricromică, microfoto 10 X 40). BIBLIOGRAFIE 1. Arvy Lucie, Nouv. Rev. frâng. H6mat, 1963, 3, 6, 663. 2. Grișan G., Histologie, Edit. medicală, București, 1957, 1. 3. Jitariu P., Rev. roum. Biol., Serie de Zoologie, 1966, 11, 1, 3. . 4. Kholodov Y., Biologicul effect of magnetic fields, Plenum Press, New York, 1964, 196. 5. Milcu Șt.-M., Lungu At., Hormonii și viața, Edit. științifică, București, 1965. 6. Neaga N., Lazăr M., St. și cerc, biol., Seria zoologie, 1972, 24, 2, 119. Ș 7. Neaga N., Lazăr M., Anal. șt. Univ. ,,AJ. I. Guza” Iași, Seria zoologie, 1973, 19, 1. ‘ 8. Pora E. A., Giurgea-Iacob R., Studia Univ. „Babeș-Bolyai”, Seria biol., 1968, 1, 99. ) 9. Poră E. A., Toma V., Studia Univ.,,Babeș-Bolyai”, Seria biol., 1964, 1, 130. 110. Rusescu A., Prișcu R., Timusul, Edit. Acad. R. P. R., București, 1964. ; 11. Sturkie P. D., Avian physiologg, Gomstock Publ. Ass. a. Division of Corneli Univ. Press, Ithaca, New York, 1965, ed. a 2-a. 12. Zirra A.M., Voicu A., Gomnoiu M., Stratulat L., St. cerc, balneo-fizioterapie, 1964, 4, 134. Institutul agronomic, Laboratorul de fiziopaiologie Iași, Aleea Mihail Sadoveanu nr. 3 Și Universitatea „AL I. Cuza”, Laboratorul de fiziologia animalelor și a omului Iași, Str. Universității nr. 16. Primit în redacție la 29 noiembrie 1974. OBSERVAȚII ASUPRA COMPLEXITĂȚII ȘI SPECIFICITĂȚII ANTIGENICE A ASCARIZILOR DE GĂINĂ (ASCARIDIA GALLI) DE MARIANA ȘINCAI și Academician E. A. PORA Studies concerning the complexity and specificity of ascarides in hens were car- ried out through the SPGA test; the authors succeeded in pointing out, on the one hand, the complex antigen structure of ascarides and, on the other hahd, their group specificity. The most complex ascaride extracts proved to be the metabolic products, which made up more precipitation lines than the tissue Pro- ducts in the SPGA test. Likewise, using the SPGA test, the authors pointed out the existence of anti- gen relations between ascarides in hens and other nematode helminths which parasitize in poultry or mammalia. Investigațiile întreprinse de autori ca F. G. Tromba (9), J, B i q u e t (2), J. T o r m e s (8) și alții, efectuate prin tehnici de imunodifuziune în gel de agar și imunoelectroforeză, au relevat că, de fapt, lextractele helmintice constituie complexe antigenice alcătuite dintr-un număr mai mare sau mai mic de fracțiuni antigenice. Stiîdiind structura țesuturilor ascarizilor, M. J. N a u m ic e v a (5) și J. B iqu et (2) constată că fiecare țesut (mușchi, cuticulă, lichid celomic etc.) posedă proteinele sale specifice, dar și proteine identice pentru toate țesuturile. De asemenea, J. Biquet (2), J. B. O a s t e 1 i n o (3) și alții ; evidențiază existența unor reacții încrucișate între ânumiți helminți paraziți ai mamiferelor, subliniind existența unor fracțiuni antigenice identice sau a unor structuri chimice asemănătoare pe care le conțin acești helminți. Avînd în vedere că la păsări specificitatea și complexitatea anti- genică sînt puțin cunoscute, în lucrarea de față ne-am propus să prezentăm aceste fenomene la găini. MATERIA! ȘI METODĂ DE EUCRU , ; Pentru a studia complexitatea și specificitatea antigenică a ascarizilor de găină a fost utilizată metoda dublei difuziiuni în gel de agar. . , Serul imun ăntiascarizi de găină a fost preparat pe iepuri, utilizînd pentru imunizare extractul total din ascarizi proaspeți de găină în asociație cu adjuvant Freund. Gelul necesar imunodifuziunii a fost pregătit din agar nobil Difco, 1,3 % în ser fiziologic, cu adaos de mertiolat 1/10 000. Gelul de agar a fost aplicat pe lame de sticlă, iar după întărirea lui au fost tăiate godeiiri cu diametrul de 4 mm, așezate în hexagon în jurul unui orificiu central. în godeul central a ; ST, si CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM.,'T. 28, NR. 1, P. 47-50, BUCUREȘTI, 1076 48 MARdAINA ȘilNIClAlD și JBUțGENl A. PORA fost introdus serul imun, iar în cele laterale extractul ascaridian care urma să fie analizat. î După umplerea orificiilor, lamele au fost introduse într-o cameră umedă timp de 5 zile, j perioadă in care au apărut,liniile de precipitare. Apoi, după încheierea imunodifuziunii, lamele aii fost prelucrate, fiind spălate întîi cu ser fiziologic, tamponat la pH 8, uscate și, în final, colorate cu amidoschwartz 10 B. Complexitatea antigenică a ascarizilor de găină a fost urmărită pentru o serie de ex- tracte ca: extractul total din ascarizi proaspeți, lichidul celomic, lichidul de ecloziune al larvelor, extractul total din pulbere de ascarizi, mediul de întreținere in vitro a ascarizilor, extractul din teaca musculo-cutanee, extractul din organele genitale. Relațiile antigenice ale ascarizilor de găină au fost studiate pe alte specii de helminți care parazitează la păsări sau mamifere. .. .. Extractele helmintice utilizate în expciiențele noastre, au fost obținute după metoda indicată de S. S z a b 6 și colab. (7) REZULTATELE OBȚINUTE ȘI DISCUȚII Aprecierea complexității antigenice a extractelor obținute din ascarizii de găină s-a făcut după numărul de linii de precipitare formate între fiecare extract ascaridian studiat și serul imun, rezultatele fiind redate în tabelul nr. 1. S-a constatat că cel mai complex sistem antigenic este reprezentat de extractul total din ascarizi proaspeți de găină, care a format cu serul: imun omolog 7 linii de precipitare. Tabelul nr. 1 Rezultatele imunoditiizhinii efectuate Intre serul imun antiascarizi de găină și diferite extracte antigenice ascaridiene Extractul ascaridian folosit Nr. de linii de precipitare formate cu serul imun Extract total din ascarizi proaspeți 7 Lichid celomic 5 Lichidul de ecloziune a larvelor 4 Extract total din pulbere de ascarizi 3 Extract din pulbere de ascarizi 3 fără grăsimi Mediul de întreținere in vitro al asca- 3 rizilor Extract din teaca musculo-cutanee 1 Extract din organele genitale 1 De asemenea, dintre celelalte sisteme antigenice studiate, s-au dovedit mai complexe produsele de natură metabolică, respectiv lichidul celomic (5 linii), lichidul de ecloziune a larvelor (4 linii) și produsele meta-, bolice obținute prin întreținerea in vitro a ascarizilor de găină (3 linii).? Această complexitate mai mare a produselor de natură metabolică (3 -5 linii de precipitare) este determinată, probabil, așa după cum susține și? E. J. Soulsby (6), J. B i qu et și colab. (1) și J. Euzeby (4), de conținutul lor bogat în substanțe de excreție, secreție și diferite toxine? specifice, dotate cu însușiri antigenice ridicate. ; La testul SPGA, componentele de natură somatică — tisulară — ale) ascarizilor au prezentat o structură antigenică mai puțin complexă) (1—3 linii), dovedind astfel o capacitate anticorpoformatoare mai redusă.) SPECrFiaHKATEA Aă^ȘENEtLOtR. ÎN ASC'AMDrOZA 49 ,, Studiind relațiile antigenice dintre ascarizii de găină și alți helminți pare parazitează la păsări sau mamifere, au fost obținute rezultatele redate în tabelele nr. 2 și 3, S-a constatat că au fost capabile să formeze linii de precipitare cu serul imun antiascarizi de găină, extractele obținute din unii helminți care parazitează, ca Heterakis gallinae, Capillaria gallinae Acuaria hamulosa și Amidostomum anseris, și care prezintă numeroase asemănări morfologice și biologice cu ascarizii de găină., Tabelul nr. 2 R elația antigenică dintre ascarizii de găină și alți helminți ca re parazitează la găini, evidențiată prin testul SPGA Specia helmintului din care s-a obținut extractul încadrarea sistematică Organul de elecție Nr. de linii de precipitare formate cu serul imun Ascaridia galii cl. Nematoda intestin 7 Heterakis gallinae i> i, cecum 4 Capillaria gallinae •« ii intestin 3 Syngamus trahea >> >> trahee .— Acuaria hamulosa stomac 1 Amidostomum anseris ii M stomac 1 Hymeholepis carioca cl. Cestoda intestin .— Railletina tetragona »? 11 intestin . — Tabelul nr. 3 Rplnția antigenică dintre ascarizii de găină și diferiti helminți care parazitează la mamifere, evidențiată prin testul do SPGA Specia helmintului din care s-a obținut extractul încadrarea sistematică Animalul la care parazitează Nr. liniilor de precipitare cu serul imun Neoascaris vitulorum cl. Nematoda vițel 3 Parascaris equorum ii 11 cal 3 Ascaris suum • • • • porc 3 Toxocara caniș ■ * * t cline 3 Oxiuris equi • « • • cal 1 Ștrongilus vulgarls • « • « cal • :— Trichuris suis porc — Metastrongilus elongatus ,, 11 porc — Dictyocaulus filaria cl.Cestoda oaie — Moniezia expansa oaie — Fasciola hepatica 11 11 oaie ’ : ‘ Această înrudire antigenică între ascarizii de găină și cei 4 helminți care parazitează în tubul digestiv la păsări este datorată, probabil, atît existenței unor antigene identice, cît și unei asemănări chimice între anu- ihite substanțe antigenice conținute în structura helminților, capabile să inducă; formarea 'de anticorpi asemănători, care determină apariția reac- țiilor imuhologice încrucișate. De asemenea, s-a observat că au fost capabile să formeze linii de precipitare cu serul imun antiascarizi de găină și extractele totale obținute din helminți aparținînd ordinului Asearidata, și care parazitează la mami- ( 4-c. 678 50 IMABUAINIA ȘIIN)CIA)D și EUGENI A. FORIA. fere. Aceste relații antigenice sînt, desigur, datorate unei asemănări fizio- logice și mai ales unei înrudiri biochimice, care presupun existența unor substanțe antigenice identice sau cu structură chimică asemănătoare. Existența unor relații antigenice între ascarizii de găină și alți hehninți care parazitează la păsări sau mamifere, mai îndepărtați din ; punct de vedere sistematic, sau cu alte locuri de elecție în tubul digestiv și care nu au format linii de precipitare cu serul imun antiascarizi de găină nu trebuie exclusă, aceste relații putînd fi puse în evidență și prin utili- zarea altor tehnici decît testul SPGA. Existența înrudirilor antigenice între anumiți helminți poate con- stitui adesea cauza unor erori în diagnosticul indirect al parazitozelor bazat pe reacții imunologice, însă aceasta deschide perspectiva folosirii unor extracte de la helminți cu largă răspîndire, în imunoprofilaxia unor helmin- toze importante, dar cu o epizootologie mai restrînsă. CONCLUZII 1. Dintre extractele obținute din ascarizii de găină prin testul SPGA . s-a dovedit că cel mai complex sistem antigenic îl constituie extractul total din ascarizi proaspeți de găină, care a format cu serul imun omolog 7 linii de precipitare. 2. Componentele de natură metabolică ale ascarizilor au prezentat o complexitate antigenică mai mare (3—5 linii de precipitare) decît componentele somatice — tisulare (1—3 linii de precipitare). 3. Utilizînd testul de SPGA, s-ă constatat existența unor înrudiri antigenice între ascarizii de găină și alți helminți nematozi, care parazi- ( tează în tubul digestiv la păsări, precum și între ascarizii de găină și alte. specii de ascarizi sau helminți nematozi aparținînd ordinului Ascaridata care parazitează la mamifere. BIBLIOGRAFIE 1. Biquet J., Rose A., Capron A., Van Ky Tban, Rev. Iminunol. Therap. antimicrob., 1965, 29, 1, 5-30. 2. Biquet J., Bull. Soc. Pharm. Lille, 1968, 19—30. 3. Casteeino J. B., Văt. Bull., 1970,40, 20, 751 —757. ' 4. Euzeby J.,Rev. MM. văt., Toulouse, 1968, 119, 20, 879—898. 5. Naumiceva M. J., Veterinaria, 1967, 43, 55—57. 6. Soulsby E. J., Ann. N. Y. Acad. Sci., 1963,113, 2, 496—509. 7. Szab6 S., Fazekas B., Laszlo J., Wagner A., Rev. microbiol. parasitol. epidem., 1964, 3, 249-253. 8. Tormes J., Anal., Inst. Invest. vet. Navara, 1969, 18, 67—83. 9. Tbomba F. G., J. Părăsit., 1962, 48, 839—845. Facultatea de zootehnie și medicină veterinară Timișoara, Calea Aradului nr. 59 ?i Universitatea „Babeș-Bolydi” Cluj-Napoca, Str. Clinicilor nr. 5—7. Primit în redacție la 18 noiembrie 1974. ACȚIUNEA CONJUGATĂ A ADRENALINEI ȘI IMIPRAMINEI ASUPRA RESPIRAȚIEI CEREBRALE LA ȘOBOLAN DE EUGENIA CHENZBRAUN și C. A. PICOȘ The oxygen consumption of the brain homogenates in the rat was investigated after separate and associate admi'nistration of adrenaline and imipramine in large doses (1 mg and, respectively, 6.25 mg/g tissue). In all the cases, the re- duction of the oxygen consumption of the experimental homogenates has been found. This reduction was more pronounced under the separate action of adre- naline and imipramine (— 63% and, respectively, — 56%) and more reduced under associate action of both substances (—36%). Cercetările noastre anterioare (3) cu privire la acțiunea imipraminei asupra consumului de oxigen al creierului de șobolan au arătat că această substanță induce o scădere apreciabilă a respirației cerebrale (—51,38%). Lucrările recente ale lui L. G y e r m e k (4) au demonstrat că imipramina intensifică efectele periferice ale epinefrinei și 5-hidroxitriptaminei, suge- rînd, totodată, că acest antidepresiv triciclic ar putea avea efecte similare și la nivelul sistemului nervos central. După E. L. Scelkunov (6), imipramina intensifică efectul hipotermic al adrenalinei (1—20 pg), constatat de E. T. B r i 11 a i n și S. L. H a n d 1 e y (2) la șobolani, în cazul injectării substanței în ventriculii cerebrali. Cercetările ulterioare ale lui E. L. Scelkunov (6) au arătat că dozele mari de hidrotartrat de noradrenalină (26 pg), injectate intraventri- cular, provoacă un efect hipertermic, care de asemenea, este, intensificat de imipramină. Pornind de la aceste date și luînd în considerare faptul că în litera- tura științifică nu există indicații cu privire la acțiunea conjugată a imi- praminei și adrenalinei asupra respirației cerebrale, ne-am propus să inițiem o serie de cercetări în această direcție. MATERIAL ȘI METODĂ Experiențele au fost efectuate pe 10 șobolani masculi, adulți, în greutate medie de 250 g, de la care a fost prelevat creierul, imediat după sacrificarea lor. Omogcnatele de creier au fost preparate în soluție Ringer, respectîndu-șe proporția de 200 mg țesut la 1 ml soluție (corespunzătoare mărimii probelor). Consumul de oxigen a fost determinat după metoda mano- inetrică Warburg. Probele de control au fost incubate în soluție Ringer (2 ml), iar cele de expe- ; riență, în soluție Ringer (R), la care s-au adăugat substanțele a căror acțiune a fost cercetată, și anume 1,9 ml R + 0,1 ml soluție de clorhidrat de imipramină 1,25% (6,25 mg/g țesut); i 1,9 ml R + 0,1 ml soluție de adrenalină l°/00 (1 mg/g țesut); 1,8 ml R + 0,1 ml soluție de : ST.'Șt CERC. BIOL., SERIA BIOL. ANIM., T. 28, NR. l.P. 51-54, BUCUREȘTI, 1970 . 52 EUGENIA CHENiZBRiAUN șl C. A. BICOȘ 2 j > imipramină + 0,1 ml soluție de adrenalină (in concentrațiile indicate în primele două variante experimentale). în afara substanțelor menționate, toate vasele manometrice conțineau (în calicele central) cîte 0,3 ml NaOH(20%), pentru absorbția CO2. în toate cazurile, probele tisulare au fost lăsate să respire timp de 30 min, la temperatura de 38°C. Consumul de oxigen al omogenatelor a fost exprimat în p.1 O3 pe gram de substanță Uscată și pe oră, iar valorile obținute au fost supuse prelucrării statistice. BEZULTATE Valorile medii ale consumului de oxigen- al omogenatelor de creier / — probe martor și de experiență — sînt reprezentate grafic în figura 1. ș Analiza rezultatelor arată scăderea consumului de oxigen al omoge-; ' natelor tratate, după cum urmează : cu 63 % sub acțiunea adrenalinei, cu 56% sub acțiunea imipraminei și cu 36,7% sub acțiunea conjugată a! adrenalinei și imipraminei. Fig. 1.—Respirația țesutului cerebral de șobolan în condiții standard (S), sub acțiunea imipraminei (I), a adrenalinei (A) și a imipraminei și adrenalinei (I + A). Două concluzii se impun deci atenției: 1) efectul produs de adre-( nalină este mai puternic decît cel produs de imipramină (p< 0,0005 făță^ de p < 0,05); 2) sub acțiunea conjugată a adrenalinei și imipraminei,§ scăderea consumului de oxigen al omogenatelor de creier este apropiată'1 de aceea provocată de imipramină (p < 0,05 și, respectiv, p <0,05) șt mult mai slabă decît aceea indusă numai de adrenalină (p < 0,05 față d^ p< 0,0005). 6 DISCUȚII Datele obținute de noi cu privire la acțiunea adrenalinei asupraj respirației cerebrale la șobolan arată că, în doză mare (1 mg/g), substanța^ induce o foarte semnificativă scădere a consumului de oxigen al omogenaj telor de creier. Rezultatele sînt concordante au datele existente în litera| 3 BHSPrBAȚJAi CEIREBIBIAILA DA ȘOBOLAN 53 tură, care certifică efectul depresor al dozelor mari de adrenalină asupra metabolismului respirator al șobolanilor și al altor animale de laborator. Menționăm datele lui L. Lundh olm (5), după care doze variind între 4 și 100 y/kg (injectate subcutan) au provocat creșterea consumului de oxigen al cobailor în repaus. Creșterea este funcție liniară de doză pînă la, 1 mg/kg, după care consumul de oxigen scade sub valoarea bazală. După H. Ankermann (1), metabolismul respirator al șobolanilor crește după injectare intravenoasă de adrenalină (lgg/100 g greutate corporală/min) și scade la mărirea dozei. După R. T. B r i 11 a i n și S. L. Han d 1 e y (2), doze de adrenalină, variind între 1 și 20 gg, injec- tate în ventriculii cerebrali la șobolan, provoacă o ușoară și tranzitorie creștere a temperaturii corporale, urmată de scăderea constantă a acesteia, în concordanță cu aceste date, rezultatele obținute de noi arată că, în doză mare, substanța exercită o acțiune similară și asupra respirației cerebrale, provocînd o diminuare sensibilă a consumului de oxigen al omogenatelor de creier. Atunci cînd acționează concomitent cu imipramină, adrenalina induce un efect hipometabolic mai redus (—36%) decît în cazul cînd acțio- nează singură (—63%). Rolul pe care îl joacă activarea structurilor adrenergice centrale în ansamblul mecanismelor de acțiune a antidepre- sivelor pare a fi deosebit de complex. în experiențele lui E. L. S c e 1 k u- n o v, imipramină intensifică efectul hipermetabolic, provocat de dozele mari de noradrenalină (20 gg), atunci cînd este administrată îh doze mici (2,5 — 5 gg), în injecții intraventriculare. în cazul injectării intraperito- , neăle, substanța nu provoacă același efect decît la doza de 125 pg. Efectul nu este determinat numai de calea de administrare a imi- praminei. Diferențe mari au fost consemnate în funcție de utilizarea iod- metilatului, respectiv a clorhidratului de imipramină. Astfel, injectarea intraventriculară a iodmetilatului induce un efect de potențare mai amplu decît cel produs de clorhidratul de imipramină. în condițiile injectării intraperitoneale, însă, iodmetilatul de imipramină (5p.g/kg) nu intensifică hipertermia noradrenalinică, în timp ce clorhidratul de imipramină acționează în acest sens. în experiențele noastre, clorhidratul de imipramină (6,25 mg/g țesut) nu a intensificat reducerea consumului de oxigen al omogenatelor de creier provocată de adrenalină. Dimpotrivă, rezultatele obținute sugerează că imipramină limitează acțiunea exercitată de adrenalină asupra res- pirației cerebrale. Rămîne de văzut dacă efectul se menține în condițiile utilizării unor doze mici de imipramină (cercetări în curs de efectuare). CONC1UZII 1. Sub acțiunea separată a adrenalinei (1 mg/g țesut) și imipraminei (6,25 mg/g țesut) se produc scăderi considerabile ale consumului de oxigen al omogenatelor de creier de șobolan (—63 % și, respectiv —56 %). 2. Sub acțiunea conjugată a celor două substanțe, administrate în aceleași doze, omogenatele de creier de șobolan își reduc consumul de oxigen într-o măsură mai puțin importantă (—36%). 54 EUGENIA CHENZBRiAIUN și C. A, PDCOȘ 4 BIBLIOGRAFIE 1. Ankermann H., în Biologically active amines found in mati, de F. Franzen, K. Eysell, Pergamon Press, Oxford, Londra, Edinburgh, New York, Toronto, Sydney, Paris, Braunschweig, 1969. 2. Brittain R. T., Handley S. L., J. Physiol., Lond., 1967,192, 805—806. 3. Chbnzbraun E., Picoș C. A., Rev. roum. Biol., Serie de Zoologie, 1973, 18, S, 355 — 358. 4. Gyermek L., International review of neurobiology, Acad. Press, New York—Londra, 1966, 9, 95-143. 5. Lundholm L., Acta physiol. scand., 1949,19, Suppl. 67. 6. Scelkunov E. L., Biull. eksp. biol. med. Moscova, 1973,11, 80—83. Facultatea de biologie, Catedra de ecologie și fiziologie animală București 35, Splaiul Independenței nr. 91 — 95. Primit în redacție la 20 noiembrie 1974. INFLUENȚA ADMINISTRĂRII ALGELOR ASUPRA TIROIDEI ANIMALELOR DE LABORATOR ÎN REGIM HIPOIODAT DE V. TEODORU, GRAZIELLA NICOLAU, ST. HRISANIDI, MARIA STADNICIUG și A. STRÎMBEANU The hypoiodinated diet applied along 4 montlis to Wistar rats and Rap mice induced ultrastructural (colloid goiter and hyperplastic goitcr) and funcțional (lowering of serum PBI) changes in the thyroid. Some images of submicroscopic structure indicate the effort of the thyroid to adapt to iodine deficiency. Supplementing the hypoiodinated diet with marine algae flour the ultrastructure and function of the gland is kept within normal limits due to exogenous iodine. The utilization of marine algae flour in the diet of animais living in iodine defi- ciency areas is recommended. în lucrarea de față prezentăm rezultatele cercetărilor noastre în cadrul •cărora am urmărit modificările funcționale și structurale submicroscopice ale tiroidei de șobolan și de șoarece, modificări induse experimental prin dieta carențatăîn iod, și posibilitatea prevenirii acestora prin introducerea făinii de alge marine ca supliment la regimul hipoiodat. Interesul pentru algele marine este justificat, printre altele, de conținutul ridicat în proteină și iod al acestora (1), (2), (6), (9), (10), (13), precum și datorită cantităților mari exploatabile din Marea Neagră. MATERIAL ȘI METODĂ Cercetările au fost efectuate pe un număr de 74 de șobolani Wistar și 70 de șoareci Rap. Din fiecare specie am constitiiit un lot martor, un lot care a primit timp de 4 luni un regim ■de alimentație hipoiodat, adaptat după Remington de Șt.-M. Mi leu și colab. (3), și un lot căruia i s-a administrat timp de 4 luni același regim hipoiodat, însă suplimentat cu făină de alge marine (0,05 — 0,06 g pe zi și animal la șobolan și 0,005 g la șoarece). Algele, din speciile Enteromorpha, Cladophora și Chlorophyta recoltate la Agigea, uscate și măcinate, au •avut un conținut de 4,65 mg iod/100 g s.u. și umiditate 9%. în acest fel, un șobolan din •ultimul lot a ingerat zilnic circa 3 (ig iod (0,66 jig prin rație hipoiodată + 2,3 p.g prin făină de alge). S-a efectuat electronomicroscopia tiroidei și s-a determinat conținutul in iod proteic țPBI — protein bound iodine), reprezentînd fracțiunea hormonală legată de proteinele serice de transport și constituind un indice direct proporțional cu funcția glandei. Probele de sînge pentru determinarea PBI și tiroidele au fost recoltate preexperimental, după 2 și 4 luni de ,1a Începerea experienței. La dozarea nivelului PBI s-a folosit metoda incinerării alcaline (11). Tiroidele au fost prelucrate după tehnica lui D. D. Sabattini și colab. (8), iar examinarea s-a făcut la microscoapele electronice Zeiss EN 9 OPTON și SEM. ST. SI OEEO. BIOL.. SEBIA BIOL. ANIM., T. 28, NB. 1, P, 56-58, BUCUBESTI. 1976 56 V. TIHCHDOIRIU și COLABORATORI 2 rezultate și discuții Valorile PBI sînt prezentate în tabelul nr. 1. Din datele obținute rezultă că dieta experimentală deficitară în iod a determinat hipofuncția tiroidei, tradusă prin reducerea nivelului PBI, iar administrarea algelor, în regim deficitar în iod, a menținut glanda într-o funcție normală. Tabelul nr. 1 Conținutul In PBI din Blnge (ixg/100 ini) Șobolan Șoarece martor Ia 2 luni la 4 luni martor la 2 luni la 4 luni hipo- iodat hipo- iodat + alge hipo- iodat hipo- iodat + alge hipo- iodat hipo- iodat ± alge hipo- iodat hipo- iodat ± alge 2,51 ± 0,206 1,16± 0,118 3,70 ± 0,05 1,53± 0,141 2,90± 0,236 4,00 ± 0,316 2,65 ±0,125 5,3 .. ±0 2,57± 0,440 4,50 ■ ±0,02 —p<0,01-J Lp<0,001-1 .p<0,01 Lp< 0,001-1 —p> 0,05—1 1—p<0,05—1 — -p < 0,05 —p<0,05_l Se remarcă faptul că după 4 luni de utilizare a. algelor media PBI s se apropiere cea a martorului, ceea ce denotă rolul făvorabil ăl acestora în: corectarea funcției glandei. De,asemenea reține atenția sporirea conținutului în PBI la șobolanii crescuți cu rația săracă în iod după 4 luni de regim față de 2 luni (1,53 ± 0,141 față de 1,16 + 0,118 p.g/100. ml). Această variație a curbei iodului hormonal pare să demonstreze încercarea de adaptare a tiroidei la deficitul alimentar de iod pe o perioadă mai lungă. Rezultatele înregistrate confirmă datele noastre anterioare (12), cînd, în urma administrării făinii de alge marine, timp de 45 de zile, la rația in- tegrală a vacilor din zona carențată în iod Cîmpulung, focar endemic, s-a obținut o creștere a mediei de PBI cu 75,26% în sînge și cu 88,37% în lapte, medie ajunsă astfel la valoarea normală. Constatări similare au făcut V, I. P r o h o r o v a și N. V. T r u s o v . (7). îh aceeași zonă gușogenă Cîmpulung, V. Teodoru1 a observat ridicarea nivelului de PBI în sîngele și laptele vacilor la care s-a .înlocuit în rație uruiala. de porumb cu făina de alge marine în proporție de 10%. Administrarea algelor marine în hrana vacilor permite obținerea laptelui „iodat” (îmbogățit de iod), pentru folosire în alimentația umană și a tineretului animal din regiunile deficitare în iod. : în ceea ce privește imaginile de microscopie electronică, după 2 luni de regim hipoiodat tiroida șobolanilor și a șoarecilor prezintă aplatisări ale celulelor epiteliale, observate și la nucleu (fig. 1 și 2). Microvilii sînt slab vizibili, cu tendință de dispariție. -Nucleul indică pinteni citoplasmatici, 1 V. Teodoru, A. C o n s t a n t i n e s c u, M. Stadniciuc, L’effet produit ' par Ies algues marines, comme substiluanl du maîs sur la fonction tyro'idienne des vaches, d'une region endimique (sub tipar). ■■ ■ ■ • •' ...... ■ ■ ■ .. ." Fig. 5. — Tiroida de șoarece după 2 luni de regim hipoiodat + Fig. 7. — Tiroida de șoarece după 4 luni de regim hipoiodat — ten- alge — aspect normal (x 9 500 x 2). dința de revenire spre normal (x 4 000 x 2). Fig. 6. — Tiroida de șobolan după 4 luni de regim hipoiodat — gușa Fig. 8. — Tiroida de șobolan după 4 luni de regim hipoiodat + alge coloidă intensă ( X 9 500 x 2). — aspect normal ( x 2 000 x 2). 3 zADMBNISTiRABEA AILGBLOR ÎNI REGIMUL HIPIOtllOlDAfr 57’ unii dintre ei pătrunzînd în nucleu pînă la jumătate. Cromatina nucleară fără modificări sesizabile. Reticulul endoplasmatic rugos, deși evident, are sacii puțin dilatați și conținut uniform. Se remarcă și prezența unor rare cisterne cu aspect dilatat. Mitocondriile, cu aspect neregulat, au criste șterse și sînt reduse ca număr. Ribozomii solitari și polizomii nu se regăsesc. în citoplasmă apar formațiuni osmiofile de formă rotundă sau ușor alungită, diseminate neregulat. Coloidul are aspect omogen, slab colorat, fără vacuole de resorbție. în figura 2 se observă prezența de coloid intracitoplasmatic ocupînd o porțiune însemnată. Examinarea făcută atestă gușa coloidă. în tiroida animalelor supuse la dietă timp de 2 luni se constată și imagini de hiperplazie (fig. 3). Celula este cilindrică, nucleul mare, unele cisterne ale reticulului endoplasmatic rugos sînt mult dilatate. Coloid redus. Vase capilare dilatate. . Putem conchide că după 2 luni de regim deficitar în iod tiroida animalelor de laborator studiate prezintă imagini de gușă coloidă și de gușă hiperplastică. Tiroidele . șobolanilor și șoarecilor crescuți cu regim hipoiodat și adaos de alge timp de 2 luni au aspect normal (fig. 4 și 5). Nucleul este rotund șau ușor elipsoidal, cu cromatina răspîndită în general difuz și condensări îndeosebi marginale în formă de pinten. Reticulul endoplas- matic rugos este evident, fără să prezinte cisterne dilatate. în interiorul cisternelor se constată prezența materiei omogene granulare (coloid). Ribozomii solitari și grupați. Mitocondrii, în număr mare, în limite și aspect normale. Microvilii sînt evidenți sub forma unor proliferări cu aspect de deget. La tiroidele loturilor de animale din amîndouă speciile se constată după 4 luni de regim hipoiodat o accentuare a aspectelor de gușă coloidală (fig. 6), caracterizată prin creșterea cantității de coloid, alungirea și crene- larea mai mare a nucleului, micșorarea acestuia, condensarea cromaținei nucleare spre marginile nucleului sub forma unui strat aproape continuu. Reticulul endoplasmatic și ribozomii aproape au dispărut. în citoplasmă se găsesc numeroase formațiuni cu aspect vaciiolar, demonstrînd o distrofie vacuolară sau a unor grăsimi dizolvate în cursul prelucrării pieselor. Număr redus de microvili. ■ Succesiunea leziunilor descrise de noi ca urmare a regimului hipoiodat diferă în timp față de evoluția procesului gușogen prin dietă deficitară în iod, prezentată de Șt.-M. M i 1 c u și colab. (3), fapt explicabil avînd în vedere că această succesiune se datorește unor faze alternative de echilibru și dezechilibru hormonal între secreția de tireotrop, nivelul hormonilor tiroidieni în sînge și necesitatea crescută sau scăzută de hormoni la periferie, în raport cu reactivitatea individuală. în unele tiroide de șobolani și șoareci am constatat, după 4 luni de regim hipoiodat, imagini care ilustrează tendințe de apropiere spre tabloul normal, concretizate printr-o verticalizare a celulei și nucleului, evidențierea mitocondriilor și a reticulului endoplasmatic rugos (fig. 7). Aspectul ni se pare inedit și dovedește că deficiența în iod produce reacții de adaptare a tiroidei (compensări, economii în metabolismul iodului). După 4 luni de regim hipoiodat și adaos de alge, tiroida animalelor a evidențiat un aspect normal (fig. 8). 58 V. THODOB'U și COLABORATORI 4 CONCLUZII Instituirea regimului hipoiodat la animalele de laborator (șobolani și șoareci) a determinat modificări ultrastructurale (proces gușogen) și funcționale (scăderea PBI plasmatic) ale tiroidei. Unele imagini de electro- nomicroscopie care indică tendința tiroidei spre revenire la normal după 4 luni de regim hipoiodat pot fi considerate ca o consecință a efortului din partea organismului de a se adapta la deficitul de iod. Adaosul de alge marine la regimul hipoiodat a prevenit modificările în ultrastructura și funcția tiroidei, menținîndu-le normale. Rezultatele obținute, corelate cu cele înregistrate anterior de noi la taurine, pledează pentru introducerea algelor marine în alimentația animalelor din zonele deficitare în iod din țara noastră. BIBLIO GRAFIE 1. Banu C., Industria alimentară, 1973, 24, 7, 367. 2. Dinu M., Vîlcu B-, Natura, Seria biol., 1969, 20, 4, 13. 3. Milcu Șt.-M. și colab., Fiiiopalologia experimentală a glandei tiroide, Edit. Acad; R. P. R., București, 1963. 4. Milcu Șt.-M.,Teodorii V., PopAN., St. cerc, biol., Seria zoologie, 1970, 22, 6, 501. 5. Milcu Șt.-M., Teodoru V., Hrisanidi Șt., St. cerc, biol., Seria zoologie, 1971, 23, 3, 209. 6. MOntz K„ Lebensmittelind, 1971, 18, 2, 52. 7. ProhorovaV. I.,TrusovN. V., Jivotnovodstvo, 1969, 31, 2, 55. 8. Sabattini D. D.,Bensch K., BarnnetR. J., J. CellBiol., 1963,17,19. 9. Simionescu Cr., Rusan V., Popa V., Chimia algelor marine, Edit. Academiei, București, 1974. 10. Stancu M., Sbgal B., Surse noi de proteine, Edit. științifică, București, 1975. 11. StolO V„ Estimalion of iodocompounds in biologicul material, Publ. House of the Slovak Acad, of Sci., Bratislava, 1966. 12. Teodoru V. și colab., Cercetări marine, IRCM, 1972, 4, 241. 13. Teodoru V., Stadniciuc M., Ferma și IAS, 1973, 25, 12, 25. Institutul de endocrinologie București 61, Bd. Aviatorilor nr. 34 — 36, Institutul ,,V. Babeș” București 35, Splaiul Independenței nr. 101 și Institutul de cercetări marine Agigea, Constanța. Primit in redacție la 30 septembrie 1975. CARIOTIPUL ȘI IDIOGRAMA LA BOS TAURUS L. DE BRÎNDUȘA-ELENA LIVESCU The genetic analysis carried out in 1,036 metaphases from the whole blood culture of Bos taurus L. species confirmed the euploid number (2n = 60) in 89.5%. By measuring the chromosome pairs of 500 karyotypes (250 male and 250 female karyotypes) coming from 5 males and 5 females individuals, after computing their average relative lengths, a species idiogram was established. The X chromosome belonged to the submetacentric type being the biggest in the set with an arm ratio of 0.56, The Y chromosome was also submetacentric and had 0.78 arm ratio being sjtuated between the 25țh and the 26th pair of chromosomes. Owing to the great morphological uniformity of autosomes only the lengths criterion can be used for karyotyping. Nevertheless, 10% of the karyotyped metaphases displayed an autosomes nonuniformity in the posițion of the centromere. This condition led to the classification of the chro- mosomes in subtelocentric (16 pairs) and acrocentric (13 pairs of autosomes). Primele încercări de numărare și observare a cromozomilor la anima- lele domestice datează din 1925 — 1930, perioadă marcată de introducerea fixatorilor de tip Flemming acetic și Bouin-Allen. H . F. K r a 11 i n g e r (7) în 1927 dă primul număr corect de cro- mozomi la specia Bos taurus : 2n = 60 (59 elemente telocentrice și 1 cromozom sexual metacentric). El folosește fixator Bouin-Allen și metoda secțiunilor histologice. Presupune existența la această specie a ținui determinism sexual de tip XX/XO. Abia în 1944, studiind cromozomii meiotici, S. M a k in o (9) observă pentru prima dată cromozomul Y și stabilește determinismul sexual corect la această specie : XX/XY. Numeroase cercetări ulterioare au confirmat următoarea configurație cromozomică la Bos taurus : 58 A + XY pentru mascul; 58 A + XX pentru femelă. în ceea ce privește morfologia cromozomică la această specie, unii autori (12), (14) consideră cromozomii sexului de tip metacentric. Majori- tatea (2), (3), (6), (13) sînt însă de acord că cromozomii sexuali sînt sub- metacentrici, cu un raport al brațelor diferit de 1. Autosomii sînt elemente relativ uniforme, diferind numai în ceea ce privește dimensiunile. Unii autori (10), (11), (13), descriu acești cromozomi cu centromerul terminal, definindu-i telocentrici. Alți autori (3), (6), (14) îi consideră acrocentrici, ceea ce presupune așezarea subterminală a centromerului. Din studii făcute asupra structurii cromozomilor se cunoaște însă că, în nici o situație, centromerul nu poate ocupa o poziție absolut terminală, din cauza lipsei ST. ȘI CERC. BIOL. SEBIA BIOL. ANIM., T. 28, NE. 1,1P. 59-66, BUCUREȘTI. 1976 61 60 BRÎNDUȘA'ELENA LIVESCU 2 de adezivitate a telomerelor. Ca atare este de preferat denumirea de acro- eentrici data cromozomilor de taurine, chiar dacă, din cauza dimensiunilor foarte reduse, brațul scurt este insesizabil. Cercetările asupra complementului cromozomic la Bos taurus L. nu s-au rezumat numai la descrierea cariotipului, ci s-au extins și asupra cunoașterii dimensiunilor cromozomilor, precum și asupra dispersiei numă- rului de cromozomi (1), (4), (5). în lucrarea de față ne propunem să prezentăm cîteva rezultate ale studiilor întreprinse în laboratorul nostru pentru cunoașterea complemen- tului cromozomic normal și a parametrilor idiogramei la specia Bos taurus L. MATERIAL ȘI METODĂ Cercetările noastre au fost efectuate pe culturi de leucocite din sîngele periferic de la 10 indivizi de Bos taurus (5 masculi și 5 femele). Pentru obținerea mitozelor din leucocite am folosit o tehnică de microcultură, utilizată la om și adaptată în laboratorul nostru, care necesită 10 ml mediu de cultură IC86, 0,8 ml ser normal de vițel, 0,2 ml fitohemaglutinină M, 0,1 ml fitohemaglutinină P și adaos de antibiotice pentru 1 ml sînge integral. După o incubație de 68 — 72 de ore la 38,5°C culturile au fost prelucrate în mod obișnuit și preparatele au fost efec- tuate prin uscare la flacără. Preparatele au fost examinate și fotografiate la microscopul de cercetare MCu pe film DKa, iar copiile fotografice au fost efectuate pe bîrtie BCP. Pentru studiul distribuției numărului de cromozomi au fost examinate în medie 103 metafaze pe cap de animal, deci un total de 1 036 de metafaze. Pentru calcularea parametrilor idiogramei normale de specie au fost cariotipizate și măsurate cîte 50 de cariotipuri pentru fiecare individ, deci 250 de cariotipuri mascule și 250 femele, provenind din metafaze care au prezentat în general același grad de spiralizare și deci de condensare a cromozomilor. Avînd în vedere sincronia evoluției tuturor cromozomilor dintr-un nucleu în timpul, diviziunii, am considerat că toți cromozomii se contractă în același timp și în aceeași proporție. Totuși, lungimea cromozomilor din m'toze diferite variază în limite foarte largi, în funcție de stadiul mitozei, pe de o parte, și de gradul diferit de derulare a cromo- zomilor sub efectul șocului hipotonic, pe de altă parte. Ca atare, am calculat pentru fiecare pereche de cromozomi lungimea relativă, exprimată prin raportul: lungimea elementului studiat “ 29 ATX ’ în care 29 A 4-X reprezintă lungimea setului haploid femei. Așezarea cromozomilor în cariotip s-a făcut în ordinea descrescîndă a mărimii, uniformi- tatea autosomilor nepermițînd vreo grupare morfologică a lor (fig.' 1 și 2). REZULTATE ȘI DISCUȚII Cariotip mascul de Bos taurus L. Fig. 2. - Cariotipfemei de Bos iau. Studiul distribuției celulelor în diviziune'iu funcție de numărul de cromozomi, efectuat pe 1 036 de mitoze aparținînd la 5 masculi și .5 femele, a confirmat numărul modal de cromozomi 2n *= 60, într-o proporție de 89,5%, ceea ce concordă cu datele comunicate de B. Weinh o 1 d, în 1970 (16). Restul metafazelor se distribuie în domeniul aneuploidiei, mai ales a hipodiploidiei, ceea ce ne îndreptățește să le interpretăm ca eroare de tehnică, cunoscut fiind faptul că fiecare din momentele de tra- tament și prelucrare (colchicinizare, hipotonizare, fixare, etalare pe lamă) poate induce alterări de tipul pierderii sau cîștigului de cromozomi (fig. 3). 63 62 brindvșa-elena livescu Calcularea lungimilor perechilor de cromozomi s-a făcut pe baza măsură- torii unidimensionale, efectuate pe imagini fotografice, de o mărire precis cunoscută. Valorile absolute și apoi cele relative ale lungimii perechilor de cromozomi, rezultate din prelucrarea statistică a datelor ne-au permis stabilirea diagramei lungimii perechilor de cromozomi și prezentarea tabe- lară a valorilor medii a lungimii cromozomice pentru specia Bos taurus (tabelele nr. 1 și 2) (fig. 4). Fig. 3. ■— Ponderea euploidiei și aneu- ploidiei in populația celulară analizată. rm Zn = GO Din măsurătorile efectuate rezultă că cromozomii sexuali sînt sub- metacentrici, cu un raport al brațelor de 0,56 pentru X și de 0,78 pentru Y. Cromozomul X se dovedește a fi cel mai mare din setul cromozomic, puțind fi situat înaintea perechii 1 de autosomi, în timp ce cromozomul Y fee situează printre cei mai mici, si anume între perechile 25 și 26 de autosomi. 64 BRJW.UȘA-®UEMA MVElSlCU CARIOTIPUL ,ȘI IDIOGRAMA EA BOS TAURVS L. 65' O observație demna de semnalat (8) este aceea că aproximativ 10 % din celulele analizate au manifestat o anumită neuniformitate a cromozo- milor, și aceasta nu numai în ceea ce privește mărimea lor, lucru semnalat și de E. Weinhold (15). în unele mitoze a fost posibil să se1 identifice prezența brațului scurt la, unii autosomi, ceea ce ne-a permis sa încercăm o grupare a lor (fig. 5 și 6), în raport cu poziția centromerului, în: — submetacentrici — perechea 1 — cromozomii sexuali; — subtelocentrici — perechile 2 — 17 de autosomi; — acrocentrici — perechile 18 — 30 de autosomi. Posibilitatea restrînsă de a identifica aceste particularități morfolo- gice, adică identificarea lor numai în 10 % din metafazele analizate, ar Tabelul nr. 1 Mediu și indicatorii varlaMlitdfii pentru fiecare pereche de cromozomi in valori relative Wo o) Perechea de cromo- zomi Celule mascnle (n == 250) Celule femele (n — 250) X v% X ■ v % 1 53,631 0,249 ' 7.357 53,274 0,231 - 6,8.70 2 48,820 0,174 5,673 48,360 0,168 5,51.1 3 46,269 0,144 4,929 45,869 0,131 4,541 4 44,523 0,127 4,534 44,165 > 0,110 3,956 5 ■ 43,099 0 115 4,257 42,854 0,100 3,716 6 41,909 o,ild 4,194 41,677 0,095 ’ 3,632 7 40,822 0,103 4,036 40,387 • 0,084 3,319 8 39,662 0,094 3,775 39,182 0,078 3,185 9 38,380 0,097 4,045 38,065 0,078 3,287 10 37,343 0,086 3,643 36,776 0,084 3,625. 11 36,058 0,083 3,659 35,762 0,094 4,195 12 ‘ 34,787 0,078 3,569 . 34,846 0,047 ' 2,191; 13 33,644 0,078 3,676 ' 33,354 0,083 3,991 ' 14 32,561 0,056 2,769 32,303 0,076 3,782 15 31,530 . 0,079 3,984 31,232 .0,078 3,964 16 30,568 0,075 3,923 30,420 0,095 4,995 ( 17 29,616 ' 0,076 4,102 , 29,415 0,070 3,820. 18 28,721 0,078 . 4,342 28,543 0,076 4,25.5 19 27,847 0,080 4,582 27,729 0,080 4,572 20 26,898 0,087 5,144 26,970 0,080 4,759 21 ■ 26,018 0,091 . 5,547 26,324 0,069 4,197 22 . ' < 25,091 0,091 5,757 25,366 0,080 . 4,998. 23 . 24,212 0,093 6,116 24,530 0,083 5,376 • 24 23,280 0,090 6,150 23,664 0,086 5,761 25 22,307 0,095 6,769 22,770 0,090 6,272 26 ,- 21,251 0,104 7^816 21,881 0,093 6,759 27 < 20,080 0,109 8,629 20,867 0,100 7,65Cțv 28 18,719 . 0,122 40,314 19,692 0,108 8,722 29 1-16,744 ' 0,142 13, '462 '47,747- 0,130 11,679 X 55,880 0,314 8,892 - 56,210 0,314 8,855 Y 22,148 0,255 18,233 putea fi explicată prin gradul diferit de contractare a cromozomilor în mitoze diferit^, surprinderea crombzbmildr linei celule îhtr-îin anumit moment ăl metăfazei (timpurie, tîrzie), unghiul de incidență al cromozo- milor față de lamă, acurateța preparatului etc. Tabelul hr. 2 Media șl indicatorii variabilitifii perechilor de cromozoipija Boș tovw.L. (in Valori relative) N-SW (850 de celule mascuie șt 250 de celule femele) Perechea de cromo- zomi X ■ ' s ±S£ ■ v-% Tipul morfologic Raportul brațelor 1 ■ 53,453 3,806 0,170 7,120 acrocen- tric — 2 48,590 2,725 0,121 5,608 * B — 3 . 46,069 2,194 0,097 4,756 * B — 4 44,344 1,894 0,084 4,272 —■ 5 42,977 1,720 0,076 4,003 — 6 41,793 1,643 0,072 3,931 — 7 40,605 1,516 0,067 3,734 — 8 39,422 1,398 0,062 3,546 ■— 9 38,222 1,417 0,063 3,708 -— 10 37,059 1,375 0,060 3,710 — 11 35,910 1,419 0,063 3,951 — 12 34,817 0,692 0,030 1,988 B B ——- 13 33,499 1,292 0,057 3,856 B B — 14 32,432 0,596 0,026 1,838 — 15 31,381 1,255 0,055 3,999 — 16 30,494 0,654 0,028 2,147 — 17 29,516 1,173 0,051 3,975 — 18 28,632 1,233 0,054 4,306 — 19 27,788 1,272 0,056 4,577 '— 20 26,934 1,333 0,059 4,952 — 21 26,171 0,673 0,030 2,573 . B — 22 25,233 1,363 0,060 5,407 — 23 24,371 1.410 0,062 5,785 ■— 24 23,472 1,409 0,062 6,006 —- 25 22,539 1,486 0,066 6,595 — 26 21,566 1,602 0,071 7,430 . B — 27 20,474 1,711 0,076 8,356 B B — 28 19,206 1,889 0,084 9,837 B B — 29 17,246 2,220 0,098 12,876 >> — X 56,045 4,971 0,222 8,870 submeta- centric 0,56 Y 22,148 4,038 0,255 18,233 , f 0,78 NM. X “ media estimata a lungimii perechilor de cromozom i. s = deviația standard. s- = deviația standard a mediei. v% = coeficientul de variație. BIBLIOGRAFIE NM. X =• media estlmitl a luări nil perechilor de cromozomi in valori relative. s- => deviația standard a lungimii medii. v% — coeficientul de variație. 1. Baker F. N., Salysbury G. W., Fechhbimer N. S., Nature, Lond., 1965, 208, 97. 2. Basrur P. K., Gilman J. P. W., Mc Sherry B. J., Nature, Lond., 1964, 201, 368. 3. Crossley R., Clarke G., Genet. Res., Camb., 1962, 3, 167 — 168. 4. Dobrijanov D. S., Goljdman I. L., Țitol. Ghenet., 1969, 3, 119 — 123. 5 - c. 678 66 -BMNWJȘA-EUENlAi MVtlSSCU 8 5. Gustavsson I., HerediUs, 1969, 63, 68-169, 6. Hare W. c. D., Mc Fbbly R, A., Abt D. A., Fbiebman J. R., J. nat. Cancer Inst,, 1964, 33, 105-118. 7. Rrallinorr H. F., Anat. Auz., 1927, 63, 209-214. 8. Livjsscu B.-E., Samabinbanu M., Lucr. șt. I. C. G. T., 1973,1, 23-25. 9. Marino S., Gytologia, Tokyo, 1944,13, 247-264. 10. Melander Y., Hereditas, 1959,45, 649 — 664. 11. Nichols W. W., Levan A., Lawrence W. C., Hereditas, 1962,48, 536— 538. 12. Nowele P. C-, Cancer Res., 1960, 20, 462. 13. Sasaki M. S., Marino S., J. Hered., 1962,53,157-162. 14. Ulbrich F., Wewhold E., Beri. Milnch. Tierărztl. Wschr., 1963,76, 269. 15. Wbinhold E., Beri. MUnch. Tierărztl. Wschr., 1968, 81, 314—315. 16. Wbinhold E-, Europ. Koll. Zytogenetik, Giessen, 1970. Institutul de cercetări pentru creșterea taurinelor, Laboratorul de genetică, Corbeanca — Ilfov. Primit in redacție la 21 iunie 1975. CERCETĂRI PRIVIND VARIANTELE BIOCHIMICE EREDITARE LA RASA MERINOS DE PALAS DE EUGENIA MILOVAN, I. GRANCIU și ELENA STAMATESCU For Hb and Tf determinations respectively, 540 ewes of the Merino Palas breed were studied. The amylases and ceruloplasmines showed no variation. Hb B had 70 % gene frequency. Tf had 6 identified alleles and 13 phenotypes of which Tf D had 55% and Tf A 37% gene frequency. Of 94 twin pairs 22 had an identity at Tf and Hb and might be monozygous. Male twin pairs were 50 % fewer than both females heterosexuals. Five twin pairs showed false paternity. Cercetările electroforetice asupra proteinelor serice, asupra hemo- globinelor sau a unor enzime din organismul animal au relevat existența unor variații ale acestora, aflate sub control genetic (2), (4). Studiile pe familii au permis să se stabilească faptul că transmi- terea ereditară a variantelor observate se face mendelian, și anume codo- minant. Acest mod de ereditare fiind relativ ușor de detectat, pentru faptul că nu este mascat în nici una din formele sub care este cunoscut, conferă o serie de avantaje. între aceste avantaje se, înscrie și posibilitatea folosirii ca markeri genetici ai variantelor proteice, cum sînt transferinele serice, hemoglobinele, ceruloplasminele, hemopexinele, amilazele, anhi- draza carbonică ș.a.m.d. Genele marcate, prin stabilitatea lor, constituie și un mod nou de determinare a identității indivizilor, știut fiind că acestea nu se modifică în cursul vieții. De asemenea, favorizează stabilirea pater- nității descendenților în cazuri controversate, asigurînd prin aceasta un grad sporit de precizie în selecție. La ovine s-a constatat existența polimorfismului genetic la multe tipuri de proteine, încît se consideră justificată încercarea de a le folosi în scopuri imediat utile ameliorării. Acest lucru este urmărit și în prezenta lucrare. MATERIAL ȘI METODĂ S-a luat in studiu un număr variabil de ovine, In funcție de scop, astfel: a) Pentru determinarea Hb, de la 312 cap. ovine de rasă Merinos de Palas s-au recoltat probe de slnge pe anticuagulant. Acest efectiv cuprinde oi-mame, berbeci și descendenți ai acestora In majoritate gemeni. 6) Pentru stabilirea transferinelor serice, s-au prelevat probe de ser sanguin de la un număr de 540 de ovine de rasă Merinos de Palas. Determinările de laborator au constat din electroforeza in gel de amidon descrisă de O. S m i t h i e s (5) și G. G. A s h t o n (1), cunoscută din lucrări anterioare (3). S-a procedat mai Intii la determinarea tipurilor de hemoglobine, transferine, ceruloplas- mine și amilaze, la produși, mame și berbeci. După aceasta, s-a trecut la stabilirea indicilor frecvenței alelelor și genotipurilor, la determinarea paternității și a zigoției gemenilor din populația studiată. ST. gl CERC. BIOL.. SERIA BIOL. ANIM., T. 28. NR. 1, P. «7-71, BUCUREȘTI, 1976 63 EIUVEMU.. MIL'OVAjN și COLIABORAȚOiRI 2 3 ■VtAIRIIlA.'N'IlELdE BIOCHIMICE OVINE 69 REZULTATE ȘI DISCUȚII a) S.-ap pus, în evidență trei genotipuri'de Hb (A, B și AB) (tabelul nr.l),’ între căre tipul B liomozigot predomină (49,42%) asupra tipului A, iar lie te re zi goții Hb AB se: apropie de; tipul B printr-o frecvență de peste !41%. Frecvența alelică este favorabilă genei Hb B (70% față- de gena A 30%). . . Tabelul / nr. 1 Frecventa alelelor și repartiția genotipurilor de hemogloblnă la oile de rasă Merinos de Palas Alela Frecvență Geno- tiptil Frecvența estimată Nr. observat și estiitlăt Hb A Hb B 0,296±0,0182 0,703 ±0,0183 . AA AB BB : 0,0876 0,4161 0,4942 33 (27,33) 119 . (129,85) 160 (154,19) n=312 (311,38) ?>) Transferinele serice- sînt reprezentate la această populație de' șase alele (Tf A, B? C, DțE'și M), pe bâza cărora s-âu identificat 13 feno- tipttri (tabelul nr. 2). Alelă Tf D înregistrează frecvența genică cea mai ridicată (nă%), urniîită de Tf A (37 %). " \ \ .... ■- Tabelul nr. 2 • ' Tr&fen|» iileaiWpr Și tcpaHl|>a genatipiirfc Alela' i^ Gendtipul / Frecvența estimată. Nr. observat . și estimat • •/ Tf A Q-,371±0,0147 -A A,— 0,1378 85 (74,52) ‘ Tf i> : (),553 ±0,01.51 . dd 0,3065 180 (.165,24). Tf B O,0f9±0,b041 BB 0,0003 .1 (0,205) Tf M 0,020 ±0,0043 MM '' O,obo4 ' 6 (0.216)' Tf C 0,006±0,0024- CC ■ 0,00004 2 (3,51) Tf E 0,028,0,0050 EE r ■ —• AD . 0,4111 ..s 203 (221,94) AB 0,0144 9 . (7,776) . DT • AE ■' 0,0213 ' ' 8 (11,502) " AM 0,0151 10 (8,154) ...AC , , 0,0018 1 (2,59) BD 0,0214 10 (11,55) DE 0,0317 23 (17j 172) . t' “• CD / 0,0071 2 . . (3,88) - ■ • •' ' ii ■510(528,255) ; Din cele 13 genotipuri puse în evidență,' Tf AD a înregistrat'frec- vența cea mai ridicată (41 %), urmată de Tf DD (30 %) și de Tf A A (13 %). Alte genotipuri' prezintă frecvențe simțitor mai .reduse, unele Sub 10 %, ca Tf MM, Tf BBj Tf C(% Tf A(% Tf OD. Genotipul homozigot Tf EE nu a fost prezent la nici un individ. ■ 7 .... / •hj' în ‘imnă dotermiiiării tipurilor'de Cp și de Ant nu s-a constatat' nici o variație la acești doi loci și deci absența polimorfismului, toți indi- vizii prezentau, fără excepție, o singură, bandă de migrare elecțroforetică,. d) în turma de oi supusă analizei au activat 18 berbeci pepinieri, de la care s-au găsit 77 de prpduși reținuți în unitate. Rezultatul îm- perecherilor după genotipul Tf la părinți și Ia produși este redat în tabelul nr. 3. Se poate constata că segregarea alelelor Tf la descendenți este foarte apropiată de cea estimată, probînd faptul că se respectă transmiterea ere- ditară codominantă, care caracterizează tipurile de Tf serice la ovine. Tabelul nr. 3 Segregarea tipurilor de Tf de la părinți la descendenti la ovine Merinos do Palas Fenotip părinți Fenotipul descendenților Total AA AD AE DD DE BD BB ADxAA 3(2)* 1(2) .— — . — 4 DD ■— 11(11) — 11(11) . .— — — 22 AD 7(5) 11(10) — 2(5) ■— — 20 DE — -( 0,25) -(0,25) 1(0,25) -(0,25) — — 1 DDxDD — — — 14(14) — — — 14 AD .— 6( 5,5) — 5( 5,5) — .— — 11 AE — -( 1) — — 2(1) — — 2 AA — 1( 1) — — — — — 1 BDxBD — — — -( 0,5) — 2(1) -(0,5) 2 Total 10 30 — 33 2 2 — 77 * în paranteză se prezintă numărul estimat. e) în urma analizei electroforegramelpr la cele 94 de perechi de ge- meni la nivelul locilor determinanți ai tipurilor de Hb și Tf, s-a putut sta- bili existența unei identități perfecte între cogemeni la 22 de perșphi (23,4 %). Acești gemeni se pot considera ca fiind monozigoți, pe baza iden- tității la cei 2 loci, după cum rezultă din tabelul nr. 5. Totuși, este greu de tras definitiv o astfel de concluzie, dacă nu se adaugă și alte elemente de certitudine, cum ar fi grupele sanguine,' întrucît, în acest caz, într-o proporție destul de ridicată (17 %) se găsesc și gemenii de sex opus (fra- ternali), care au și ei tipurile de Hb și Tf identice. Tabelul nr. 4 Conteni cu pațernițatea falsă Specificare Mtr. * Tf Mtr. Tf Mtr. Tf Mtr. Tf Martor Tf Mamă 7 037 DD 7103 AD 7 462 DD 2 208 DD 450 DD Tată 798 DD 1 3Q2 AD 1 566 DD 1 382 AD 810 DD Produs 1 77 DD 155 AA 345 AA 1 039 DE 1 584 DD Produs 2 * Mir.» m 78 lirico]. AD 156 DE 346 AA 1 040 DE 1 585 DE Se poate constata (tabelele nr. 5 și 6) că perechile de sex mascul sînt cu circa 50 % mai reduse ca număr față de perechile de gemeni de sex femei sau perechile de gemeni hețerosexuali (mascul și femelă). Gemenii hetero- sexuali (76 de cap.) se găsesc în proporție practic identică eu gemenii de șex femei (80 de cap.). Cauza acestui fenomen încă nn poate, fi explicată. 70 EU'GHNOIA MILIOVlAlN și COajABORA-TOMI 4 f) Analiza electroforegramelor privind tipurile de Tf serice la gemeni și la părinții acestora a dus la constatarea că în 5 cazuri paternitatea a fost falsă (tabelul nr. 4). Se poate observa neconcordanța dintre tipurile de Tf de la gemeni și cele ale părinților. Acest fapt conduce la excluderea paternității propusă pe bază de înregistrare la indivizii în cauză, eu con- secințele cunoscute privind destinația acestora. Tabelul nr. 5 Gemeni la rasa Merinos do Palas eu Hb șl TI identice Sexul Tipul Hb Tf Observații A B AB total A Dl B M AD AB AM BD DE total 4 4 4 3 — — — 1 — — 4 4 — 4 — 4 3 — — — 1 — — — — 4 Posibil monozigoți Total —- 8 • — 8 6 — — — 2 — — — — 8 ? 13 5 18 2 7 — — 6 1 1 1 18 23,4% ? — 13 5 18 2 7 — — 6 — 1 1 1 18 Total — 26 10 36 4 14 — • — 12 — 2 2 2 36